本研究用間接ELISA法檢例患者和健康輸血員血清中抗HpIgA、IgG同時還檢測了胃粘膜中的Hp,以探討Hp抗體測定的臨床意義。
1 材料和方法
1.1 材料
本組217例患者經(jīng)胃鏡及胃粘膜組織學(xué)診斷為十二指腸球部潰瘍(DU)48例,胃潰瘍(GU)27例,慢性萎縮性胃炎(CAG)18例,慢性清表性胃炎(CSG)96例,復(fù)合性潰瘍(CU)7例,胃癌(GCa)14例,胃粘膜正常2例。慢性胃炎中活動性胃炎(ACG)54例,非活動性(NACG)60例。所有患者均抽取空腹靜脈血,此外還收集了80例健康輸血員血清測抗HpIgA、IgG。
1.2 方法
①胃粘膜內(nèi)Hp菌檢測活檢粘膜直接涂片檢查及Hp的分離培養(yǎng)鑒定均參照張振華所報道的方法。②ELISA方法:從患者胃粘膜中培養(yǎng)出的7株Hp菌分離純化,超聲粉碎后在4℃下1500g離心30min,取上清蛋白定量后作抗原。用50mg/ml的抗原包被聚苯乙稀反應(yīng)板,用間接ELISA法測定,每板均設(shè)標準陽性和陰性對照,將兩者OD值用作為質(zhì)控,每板此值之差在±0.5范圍內(nèi)。結(jié)果用特測標本OD值與標準陽性O(shè)D值之比來表示,該比值在血清IgA≥0.6,在IgG≥0.5為陽性,在胃液IgA≥0.145為陽性。③吸收抑制試驗:用7例在ELISA試驗中高效價IgA、IgG的Hp感染者的血清混合后從1:10開始對倍稀釋至1:160,然后分別用Hp、空腸彎曲菌(CJ)及大腸桿菌完整的細菌和Hp抗原吸收后,按上述方法做ELISA。
計數(shù)資料用卡方檢驗,計量資料用t檢驗。
2 結(jié)果
Hp陽性患者血清中抗HpIgA、IgG含量均顯著高于Hp陰性者(P<0.01)。與細菌學(xué)比較其敏感性分別為92.1%和95.7%,特異性分別為91.1%和88.5%,符合率分別為71.7%和93.2%(表1)?梢钥闯霾煌膊≈g的血清抗HpIgA和LgG含量有顯著差異(P<0.01),兩組比較發(fā)現(xiàn)血清IgA含量在ACG組顯著高于除CU外的其它各組(P<0.05,P<0.01),消化性潰瘍各組顯著高于NACG組(P<0.01),2例組織學(xué)正常者IgA、IgG分別為0.44和0.37,80例健康輸血員血清抗HpIgA,IgG的含量和陽性率均顯著低于ACG,GU,DU及GCa組(P<0.01,P<0.05)。研究表明,血清Hp抗體與胃炎的嚴重程度有關(guān),中重度胃炎血清抗HpIgA,IgG的陽性率為82.4%和79.0%,顯著高于輕度胃炎的45.6%59.7%(P<0.01,P<0.05)。但Hp抗體含量和陽性率在淺表性胃炎和萎縮性胃炎之間無顯著差異(P<0.05表2)。
表1 胃粘膜內(nèi)Hp和血清Hp抗體的比較
胃粘膜Hp |
n |
IgA |
IgG | ||
X±S |
陽性數(shù)(%) |
X±S |
陽性數(shù)(%) | ||
陽性 |
139 |
0.79(0.19) |
128(92.1) |
0.65(0.13) |
133(95.7) |
陰性 |
78 |
0.50(0.1) |
7(9.0) |
0.45(0.13) |
9(11.5) |
表2 各種胃部疾病血清抗HpgA,IgG比較
病 種 |
n |
IgA |
IgG | ||
X±S |
陽性數(shù)(%) |
X±S |
陽性數(shù)(%) | ||
ACG |
54 |
0.82(0.2) |
49(90.7) |
0.69(0.1) |
51(94.4) |
NGCG |
60 |
0.53(0.2) |
22(36.7) |
0.47(0.1) |
23(38.3) |
GU |
27 |
0.71(0.2) |
19(70.7) |
0.59(0.2) |
20(74.1) |
DU |
48 |
0.71(0.2) |
31(64.6) |
0.57(0.2) |
34(70.8) |
CU |
7 |
0.86(0.4) |
5(71.2) |
0.58(0.1) |
5(71.2) |
GCa |
14 |
0.68(0.2) |
8(57.1) |
0.55(0.1) |
8(57.1) |
RG |
5 |
0.54(0.1) |
120.0 |
0.52(0.2) |
1(20.0) |
輸血員 |
80 |
0.47(0.2) |
27(33.8) |
0.43(0.2) |
25(31.3) |
Hp陽性患者胃液中抗HpIgA顯著高于Hp陰性者(P<0.01),與細菌學(xué)結(jié)果比較敏感性,特異性與符合率分別為96.4%92.9%和95.3%(表3)。
表3 胃粘膜內(nèi)Hp的檢出率和胃液抗HpIgA的比較
胃粘膜 |
n |
X±S |
陽性數(shù) |
陽性 |
57 |
0.438(0.234) |
55(96.5) |
陰性 |
28 |
0.101(0.045) |
2(7.1) |
不同疾病之間胃液抗HpIgA含量有顯著差異(表4,P<0.01),兩組比較發(fā)現(xiàn)ACG組、消化性潰瘍各組和CGa組顯著高于NACG組(P<0.05)。此外中重度胃炎胃液抗HpIgA的陽性率為76.6%,顯著高于累度胃炎的40.0%(P<0.05)。
表4 各種胃部疾病胃液抗HpIgA結(jié)果
病種 |
n |
X±S |
陽性數(shù)(%) |
ACG |
24 |
0.497(0.252) |
22(91.7) |
NACG |
21 |
0.162(0.161) |
7(33.3) |
GU |
15 |
0.281(0.212) |
10(66.7) |
DU |
15 |
0.269(0.208) |
12(80.0) |
CU |
3 |
0.567(0.298) |
2(66.7) |
GCa |
5 |
0.502(0.159) |
4(80.0) |
無論是完整的Hp菌還是超聲粉碎提取的Hp抗原與Hp陽性血清共同溫育后都能使血清中抗HpIgA和IgG效價明顯下降,而用大腸桿菌和Cj吸收后的血清抗體僅有少許下降,此結(jié)果證明本試驗具有特異性。
3 討論
本研究發(fā)現(xiàn)Hp陽性者血清抗HpIgA,IgG的陽性率顯著高于Hp陰性者。與細菌學(xué)檢查比較其敏感性、特異性和符合率高達95%~88%,與國外文獻報道相似。吸收抑制試驗證實本研究所用ELISA法測得的血清Hp抗體可定為特異的針對Hp的免疫反應(yīng)。因此,ELISA陽性結(jié)果強有力支持Hp感染。本研究表明,血清中抗HpIgA、IgG密切反映了消化性潰瘍的存在和胃炎的組織學(xué)變化。血清Hp抗體在ACG組的陽性率達90%以上,在消化性潰瘍?yōu)?7%和71%,而在NACG中為36%和38%。健康輸血員血清中抗Hp抗體顯著低于消化性潰瘍和慢性胃炎。此外,中重度胃炎血清中Hp抗體的含量和陽性率顯著高于輕度胃炎。上述結(jié)果表明Hp的血清檢測可用來診斷Hp感染和用作篩選胃鏡檢查患者,這將有助于那些不宜做胃鏡檢查患者的診斷,并可用于Hp感染的流行病學(xué)調(diào)查及評價和追蹤抗Hp治療效果。
Hp寄居不但可引起宿主的全身免疫反應(yīng),而且引起胃腸道的局部免疫反應(yīng)。本研究顯示,Hp陽性者胃液中抗HpIgA顯著高于Hp陰性者,與細菌學(xué)比較其敏感性、特異性和符合率高達96%至92%,高于國外文獻報道。本研究結(jié)果還表明,胃液中抗HpIgA與消化性潰瘍及胃炎的存在和組織變化密切相關(guān)。ACG組及消化性潰瘍各組陽性率顯著高于NACG組,中重度胃炎顯著高于輕度胃炎。局部分泌性IgA的確切作用尚不清楚。本研究胃液內(nèi)抗HpIgA檢測的敏感性、特異性均高于血清學(xué)試驗,這說明局部免疫反應(yīng)與Hp感染的關(guān)系比全身免疫反應(yīng)更為密切,故檢測胃液內(nèi)抗HpIgA可作為血清學(xué)試驗的補充,兩者結(jié)合可進一步提高Hp感染的免疫學(xué)診斷準確性。
謝勇 王崇文 祝金泉 張昆和 周美珍
江西醫(yī)學(xué)院第二附院(南昌 330006)