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目的序列與載體的連接

對(duì)平末端的DNA,也可先連上人工設(shè)計(jì)合成的脫氧寡核苷酸雙鏈接頭,使DNA末端產(chǎn)生新的限制內(nèi)切酶位點(diǎn),經(jīng)內(nèi)切酶割后,即可按粘性末端相連(圖20-7)。

圖20-7 人工接頭連接法

  二、平末端連接

  T4DNA連接酶也能催化限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生DNA平末端的連接。如果目的序列和載體上沒(méi)有相同的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)可供利用,用不同的限制性內(nèi)切酶切割后的粘性末端不能互補(bǔ)結(jié)合,則可用適當(dāng)?shù)拿笇NA突出的末端削平或補(bǔ)齊成平末端,再用T4DNA連接酶連接,但平末端連接要比粘性末端連接的效率低得多。

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