一、流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史
流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, FCM)是一種可以對(duì)細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測(cè)量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。其特點(diǎn)是：①測(cè)量速度快，最快可在1秒種內(nèi)計(jì)測(cè)數(shù)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞；②可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，可以對(duì)同一個(gè)細(xì)胞做有關(guān)物理、化學(xué)特性的多參數(shù)測(cè)量，并具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③是一門(mén)綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、圖像技術(shù)等從多領(lǐng)域的知識(shí)和成果；④既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是精確的分選技術(shù)。
概要說(shuō)來(lái)，流式細(xì)胞術(shù)主要包括了樣品的液流技術(shù)、細(xì)胞的分選和計(jì)數(shù)技術(shù)，以及數(shù)據(jù)的采集和分析技術(shù)等。FCM目前發(fā)展的水平凝聚了半個(gè)世紀(jì)以來(lái)人們?cè)谶@方面的心血和成果。
1934年，Moldavan1首次提出了使懸浮的單個(gè)血紅細(xì)胞等流過(guò)玻璃毛細(xì)管，在亮視野下用顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，并用光電記錄裝置計(jì)測(cè)的設(shè)想，在此之前，人們還習(xí)慣于測(cè)量靜止的細(xì)胞，因?yàn)橐箚蝹�(gè)細(xì)胞順次流過(guò)狹窄管道容易造成較大的細(xì)胞和細(xì)胞團(tuán)塊的淤阻。1953年Crosland –Taylor根據(jù)雷諾對(duì)牛頓流體在圓形管中流動(dòng)規(guī)律的研究認(rèn)識(shí)到：管中軸線流過(guò)的鞘液流速越快，載物通過(guò)的能力越強(qiáng)，并具有較強(qiáng)的流體動(dòng)力聚集作用。于是設(shè)計(jì)了一個(gè)流動(dòng)室，使待分析的細(xì)胞懸浮液都集聚在圓管軸線附近流過(guò)，外層包圍著鞘液；細(xì)胞懸浮液和鞘液都在作層液。這就奠定了現(xiàn)代流式細(xì)胞術(shù)中的液流技術(shù)基礎(chǔ)。醫(yī).學(xué) 全在.線提供www.med126.com
1956年，Coulter在多年研究的基礎(chǔ)上利用Coulter效應(yīng)生產(chǎn)了Coulter 計(jì)數(shù)器。其基本原理是：使細(xì)胞通過(guò)一個(gè)小孔，只在細(xì)胞與懸浮的介質(zhì)之間存在著導(dǎo)電性上的差異，便會(huì)影響小孔道的電阻特性，從而形成電脈沖信號(hào)，測(cè)量電脈沖的強(qiáng)度和個(gè)數(shù)則可獲得有關(guān)細(xì)胞大小和數(shù)目方面的信息。1967年Holm等設(shè)計(jì)了通過(guò)汞弧光燈激發(fā)熒光染色的細(xì)胞，再由光電檢測(cè)設(shè)備計(jì)數(shù)的裝置。1973年Steinkamp設(shè)計(jì)了一種利用激光激發(fā)雙色熒光色素標(biāo)記的細(xì)胞，既能分析計(jì)數(shù)，又能進(jìn)行細(xì)胞分選的裝置。這樣就基本完成了現(xiàn)代FCM計(jì)數(shù)技術(shù)的主要?dú)v程。
現(xiàn)代的FCM數(shù)據(jù)采集和分析技術(shù)是從組織化學(xué)發(fā)源的，其開(kāi)拓者是Kamentsky。1965年，Kamentsky在組織化學(xué)的基礎(chǔ)上提出了兩個(gè)新設(shè)想：（1)細(xì)胞的組分是可以用光光度學(xué)來(lái)定量測(cè)定的，即分光光度術(shù)可以定量地獲得有關(guān)細(xì)胞組織化學(xué)的重要信息。（2)細(xì)胞的不同組分可以同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，從而可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。換句話說(shuō)，對(duì)同一細(xì)胞可以同時(shí)獲得有關(guān)不同組分的多方面信息，用作鑒別細(xì)胞的依據(jù)。Kamentsky不僅思路敏捷，而且能身體力行。他是第一個(gè)把計(jì)算機(jī)接口接到儀器上并記錄分析了多參數(shù)數(shù)據(jù)的人，也是第一個(gè)采用了二維直方圖來(lái)顯示和分析多參數(shù)的人。
流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞化學(xué)中的應(yīng)用的先驅(qū)者是Van Dilla和美國(guó)的Los Alamos小組。他們?cè)?967年研制出流液束、照明光軸、檢測(cè)系統(tǒng)光軸三者相互正交的流式細(xì)胞計(jì)的基礎(chǔ)上，首次用熒光Feulgen反應(yīng)對(duì)DNA染色顯示出DNA的活性與熒光之間存在著線性關(guān)系，并在DNA的直方圖上清楚地顯示出細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)相。Gohde 和Dittrich接著把這項(xiàng)技術(shù)推向?qū)嵱�，他們用流式�?xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期借以研究細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)問(wèn)題。FCM用于免疫組織化學(xué)中的關(guān)鍵是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，其它和在細(xì)胞化學(xué)的應(yīng)用并沒(méi)有多大差異。
近20年來(lái)，國(guó)內(nèi)外在FCM上都做了不少的研究和應(yīng)用工作，也取得了不少成果。特別是隨著儀器和方法和日臻完善，人們?cè)絹?lái)越致力于樣品制備、細(xì)胞標(biāo)記、軟件開(kāi)發(fā)等方面的工作以擴(kuò)大FCM的應(yīng)用領(lǐng)域和使用效果。FCM在免疫組織化學(xué)中的應(yīng)用也大致差不多，并注重了在臨床應(yīng)用的推廣。
