(2)夾心法(sandwich assay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上),加入待檢標本,標本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合,洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標記抗體,洗去未結(jié)合的酶標抗體,加底物顯色,用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度,可定量測定抗原。
間接法(indirecr ELISA)常用于檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體,加入待檢標本(可能含有相應(yīng)抗體),再加入酶標抗Ig的抗全(即第二抗體),經(jīng)加底物顯色后,根據(jù)顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。
(3)BAS-ELISA:近年來對酶免設(shè)分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復(fù)合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統(tǒng)進一步提高檢測的敏感度?捎脕頇z測多種抗原抗體系統(tǒng)如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素(avidin)分子可以結(jié)合4個生物素分子(biotin)。結(jié)合非常穩(wěn)定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合,而不影響后者的生物活性。一個抗體分子可偶聯(lián)90個生物素分子,通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應(yīng)用生物-酶標親合素系統(tǒng)(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA),它是通過生物素標記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng),同時借助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。
表20-1 免疫學(xué)測定方法敏感性比較
測定方法 | 敏感性(每升) |
單向免疫擴散試驗 | <1~2mg |
雙向免疫擴散試驗 | <1mg |
火箭電泳 | <0.5mg |
對流電泳 | <0.1mg |
免疫電泳 | <5~10mg |
凝集試驗 | 1μg |
被動血凝試驗 | 1μg |
血凝抑制試驗 | 0.1μg |
補體結(jié)合試驗 | 0.1μg |
放射免疫分析法 | <1pg |
酶聯(lián)免疫吸附試驗 | <1ng |
定量免疫熒光分析 | <1pg |