血清鈣測(cè)定的方法很多,有比色法、原子吸收法、離子選擇電極法等。比色法是根據(jù)金屬指示劑或染料選擇性地與醫(yī)學(xué)招聘鈣結(jié)合后產(chǎn)生顏色變化,檢測(cè)特定波長的吸光度變化;而離子選擇電極法是利用鈣離子選擇電極測(cè)定血清中的離子鈣,然后間接計(jì)算出血清總鈣。筆者在日常工作中發(fā)現(xiàn)部分酸中毒患者血清鈣濃度明顯升高,為探討血液pH值對(duì)鈣測(cè)定的影響,筆者分別用離子選擇電極法和比色法對(duì)同一份標(biāo)本不同pH條件下測(cè)定血清鈣,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1.材料與方法
1.1 標(biāo)本來源 標(biāo)本均來自本院門診和住院病例,收集無黃疸、無溶血、無脂血標(biāo)本混合血清20份,每份6 mL 。
1.2 儀器 比色法用BS-300 全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)) ; 離子選擇電極法用MI-921D 電解質(zhì)分析儀(深圳越華科技有限公司生產(chǎn))。
1.3 試劑 比色法采用偶氮胂Ⅲ法,試劑為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BS-300 全自動(dòng)生化分析儀配套試劑,批號(hào)111507001 ;離子選擇電極法試劑為深圳越華科技有限公司生產(chǎn)的MI-921D 電解質(zhì)分析儀配套試劑,批070083,嚴(yán)格按照儀器和試劑盒說明書操作。
1.4 方法 將每份標(biāo)本6mL血清分成3組,每組2 mL ,其中第1 組分別加入10μL 中性生理鹽水(對(duì)照組) ,第2組分別加入10μL 1mol/L HCl(酸性組) ,第3 組分別加入10μL 1mol/L NaOH(堿性組) ,然后將各組標(biāo)本分別用電解質(zhì)分析儀測(cè)定離子鈣、總鈣及p H 值,生化分析儀上測(cè)定其總鈣。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用t檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
對(duì)照組比色法和離子選擇電極法測(cè)得鈣濃度分別為(2.51±0.24)mmol/L 和(2.44±0.23) mmol/L,二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P >0.05) ;酸性組為(2.43±0.19) mmol/L 和(2.67±0.21) mmol/L ,離子選擇電極法的結(jié)果比比色法高,二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);堿性組為(2.45±0.22)mmol/L 和(2.23±0.18) mmol/L ,離子選擇電極法的結(jié)果比比色法低,二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P <0.01)。在比色法測(cè)定血鈣中,酸性組的結(jié)果和堿性組與對(duì)照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P > 0.05) ,但在離子選擇電極法中,酸性組的結(jié)果比對(duì)照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01) ,而堿性組比對(duì)照組低,兩組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P <0.01)。結(jié)果見表1 。
3.討論
血清中的鈣可分為擴(kuò)散性鈣和非擴(kuò)散性鈣兩大類,前者約占60% ,其中包括離子鈣約45%以及與檸檬酸、磷酸等結(jié)合的復(fù)合鈣約15 %;非擴(kuò)散性鈣為蛋白結(jié)合鈣,約占血鈣的40% ,其中包括清蛋白結(jié)合鈣約32 %和球蛋白結(jié)合鈣約8%。離子鈣是鈣的生理活性形式,它直接影響神經(jīng)肌肉的應(yīng)激性和甲狀旁腺釋放甲狀旁腺激素。血清鈣的測(cè)定對(duì)患者是否存在高鈣血癥或低鈣血癥的診斷以及病因追查具有重要意義。血清鈣測(cè)定的影響因素很多,其中血液的酸堿度便是其中之一。本組資料顯示在比色法測(cè)定結(jié)果中,標(biāo)本的pH 值在7.22～7.61之間對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒有影響,這是因?yàn)楸壬ú粌H能檢測(cè)離子鈣,也能檢測(cè)結(jié)合鈣,一定范圍內(nèi)變化的pH 值僅影響血清中離子鈣與蛋白結(jié)合鈣之間的動(dòng)態(tài)平衡,血清鈣濃度變化不大。但在離子選擇電極法中,由于鈣電極只能檢測(cè)血清中的離子鈣,凡是影響離子鈣濃度的因素均可影響鈣測(cè)定結(jié)果。酸性條件促使蛋白結(jié)合鈣解離,蛋白結(jié)合鈣的游離度增高,因而間接測(cè)得的鈣濃度就增高。同理,當(dāng)被測(cè)樣品的pH 值偏堿性時(shí),血清離子鈣和其他成分結(jié)合加強(qiáng),使樣品中離子鈣的濃度降低,血清鈣濃度也相應(yīng)降低。在實(shí)際工作中,一般采用負(fù)壓儲(chǔ)血管采集標(biāo)本,未能隔絕空氣送檢,由于血液離體后,血液中溶解的CO2釋放到空氣中,導(dǎo)致血液pH 值逐步升高,從而使實(shí)測(cè)離子鈣濃度下降,血清鈣降低。因此,對(duì)于沒有酸堿代謝紊亂的患者,標(biāo)準(zhǔn)離子鈣濃度與實(shí)測(cè)離子鈣基本一致,用離子選擇電極法測(cè)得血清鈣的結(jié)果比較可靠。當(dāng)患者有嚴(yán)重的酸堿紊亂時(shí),二者差異較大,此時(shí)應(yīng)報(bào)告經(jīng)pH 值校準(zhǔn)到7.4的標(biāo)準(zhǔn)離子鈣值
,或者用比色法測(cè)定,以減少pH對(duì)結(jié)果的影響,使之能真實(shí)反映患者的血鈣濃度。
本站點(diǎn)評(píng)：用向血清中加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的方式改變血清的pH值，再來測(cè)定血清鈣，以研究pH對(duì)血清鈣測(cè)定的影響，此設(shè)計(jì)不妥，因?yàn)榘次闹械姆椒尤胨峄驂A后，血清的pH值將達(dá)到3或11左右，大大超出了理論上血液pH值的范圍，所以研究結(jié)果的指導(dǎo)意義并不大。
