目 錄
1. 實驗室規(guī)則光學(xué)顯微鏡的使用注意事項
2. 華支睪吸蟲
3. 布氏姜片蟲
4. 并殖吸蟲
5. 日本血吸蟲
6. 帶絳蟲
7. 曼氏迭宮絳蟲
8. 細粒棘球絳蟲
9. 似蚓蛔線蟲(蛔蟲)
10. 毛首鞭形線蟲(鞭蟲)
11. 鉤蟲
12. 蠕形住腸線蟲(蟯蟲)
13. 絲蟲
14. 旋毛形線蟲(旋毛蟲)
15. 腸道寄生蟲病原學(xué)檢查
16. 組織內(nèi)阿米巴和其它阿米巴
17. 氏賈第鞭毛蟲
18. 陰道毛滴蟲
19. 杜氏利什曼原蟲
20. 瘧原蟲
21. 機會性致病原蟲
22. 昆 蟲
實驗室規(guī)則
一、進實驗室上課時必須穿白大衣,并攜帶教材、實驗指導(dǎo)、實驗報告本及必要的文具(如鋼筆、鉛筆、彩色鉛筆、小尺等)。
二、實驗前做好預(yù)習(xí),明確實驗?zāi)康暮鸵,了解每個實驗的基本原理和具體做法,通過實驗,加深和鞏固已學(xué)過的理論知識,從而達到理論和實踐相結(jié)合的目的。
三、嚴格遵守操作程序,愛護教學(xué)標本、儀器、試劑、動物,如有遺失或損壞應(yīng)報告老師,并按學(xué)校規(guī)定進行適當賠償。
四、實驗操作時要耐心細致,自己動手,獨立思考,嚴格要求,培養(yǎng)實事求是的科學(xué)態(tài)度和認真負責(zé)的作風(fēng)。
五、上課要準時,不得無故缺席、遲到或早退,特殊情況外出或早退應(yīng)向老師請假。
六、遵守課堂紀律,保持實驗室的安靜,關(guān)閉手機、呼機,不得高聲談笑,隨便走動或進行與實驗無關(guān)的活動。
七、動物尸體、玻片、器皿、垃圾應(yīng)按要求放到指定地點,嚴禁丟入水池內(nèi),以免堵塞排水管。
八、值日生應(yīng)負責(zé)搞好實驗室的清潔衛(wèi)生,離開實驗室前應(yīng)關(guān)好水、電、門窗。
光學(xué)顯微鏡的使用注意事項
1. 顯微鏡的使用
使用自然光源的顯微鏡時應(yīng)面向光源,撥正低倍接物鏡,調(diào)節(jié)反光鏡至最大亮度,將標本置載物臺上,根據(jù)檢查標本的需要,把光線調(diào)至適宜強度,用粗調(diào)調(diào)至能看清物像后,再用細調(diào)調(diào)至最清晰。
如果要轉(zhuǎn)換高倍觀察,可將待觀察部位移至視野中央,撥轉(zhuǎn)高倍接物鏡即可。若高倍與低倍焦點不一致,則須先摸索好高倍和低倍的位置和焦距的關(guān)系,并牢記二者的關(guān)系,以后便可以自由轉(zhuǎn)換高、低倍鏡。
用油鏡時,先進行高倍觀察,將待觀察部位移至視野中央,然后用粗調(diào)提高接物鏡,在載玻片上加一滴鏡油,撥轉(zhuǎn)油鏡,眼睛從旁注視,用粗調(diào)向下旋轉(zhuǎn)使物鏡與玻片之間成最小距離,然后用細調(diào)上下旋轉(zhuǎn)至清晰,或直接用油鏡觀察。
如果你使用的是帶電光光源的顯微鏡,請注意,取出顯微鏡后,先將電源插頭插入電源插座,檢查亮度調(diào)節(jié)柄確實在最低處時,方可開啟電源開關(guān),推動亮度調(diào)節(jié)柄至合適的亮度。觀察完畢,檢查顯微鏡按規(guī)定清潔后,下降鏡臺,推動亮度調(diào)節(jié)柄至最低位置,然后關(guān)電源,拔電源插頭,將顯微鏡放回原處。
2. 放大倍數(shù)的計算
用目鏡的放大倍數(shù)乘以物鏡的放大倍數(shù),等于該顯微鏡的放大倍數(shù)。
3. 觀察標本的方法
鏡檢時載物臺不可傾斜,以免液體流出影響觀察及污染顯微鏡。
觀察標本時,每一個視野都要詳細觀察。為了減少遺漏,可按一定方向推進如↓→↑→↓→。如有可疑物像,可放大倍數(shù)觀察。
不論放大倍數(shù)如何,光線的強度都要適宜。一般來說,高倍、油鏡和比較厚的標本要求較強的光;低倍、無色標本光線宜弱。調(diào)節(jié)光線的強弱可通過上下調(diào)節(jié)聚光器或光圈的擴大和縮小或調(diào)節(jié)光源的強弱來控制。
4. 顯微鏡的維護
顯微鏡是比較貴重的儀器,也是學(xué)習(xí)的重要工具之一,維護好它十分重要。
提取顯微鏡時,一手持柄,一手托住底座,保持鏡身的垂直,防止反光鏡和目鏡脫落。顯微鏡的部件不得互相調(diào)換,如有損壞,立即向老師報告。
檢查糞便標本時,如要用高倍觀察,必須加上蓋玻片,防止糞水污染鏡頭,如不小心污染,應(yīng)立即擦干凈。
用高倍鏡或油鏡觀察時,宜使用微調(diào),并小心轉(zhuǎn)動,避免壓碎損壞鏡頭和標本。
每次使用顯微鏡后都要擦拭干凈,鏡臺鏡座用軟布擦去污物和灰塵。擦鏡頭必須用擦鏡紙,不能用草紙或紗布等。油鏡使用后,應(yīng)立刻用擦鏡紙擦干凈鏡頭上的油,然后用擦鏡紙沾少許二甲苯拭抹鏡頭,最后用擦鏡紙擦干殘余的二甲苯。若油已干,可沾少許二甲苯擦凈,再用擦鏡紙擦干。如鏡頭沾上較頑固的污物也用同樣的方法拭抹。
收鏡時將鏡頭旋在一側(cè),將聚光鏡旋落,避免兩鏡頭相撞。把亮度調(diào)節(jié)柄推至最低位置,把光源調(diào)至最小,關(guān)上電源。最后加上鏡罩(或置鏡箱內(nèi))放回原處。
吸 蟲(trematode)
一、華支睪吸蟲(Clonorchis sinensis)
目的和要求
以華支睪吸蟲為代表,掌握吸蟲基本形態(tài)和生活史的基本特點。
了解感染途徑、感染方式、寄生部位與致病作用及防治要點。
掌握蟲卵形態(tài)特征和病原學(xué)診斷方法。
學(xué)習(xí)繪制蟲卵形態(tài)圖的基本技能。
實驗內(nèi)容
成蟲
觀察液浸標本(示教):注意蟲體大小、外觀。
觀察染色標本(操作):
先用肉眼作一般觀察,然后在低倍鏡下觀察下列器官的位置、排列方式和形態(tài)特征:
附著器官:口吸盤、腹吸盤,并比較兩者的大小。
消化器官:腸支分兩支,末端是盲端。
排泄器官:排泄囊和排泄孔。
生殖器官:雌雄同體。
雄性生殖器官:睪丸的數(shù)目、形態(tài)、位置、排列方式等。
雌性生殖器官:卵巢、受精囊、卵黃腺、梅氏腺、子宮(其內(nèi)充滿蟲卵)等。
中間宿主和幼蟲(示教)
第一中間宿主:紋沼螺、長角涵螺。
觀察尾蚴染色標本。
第二中間宿主:淡水魚(鯉科魚)、淡水蝦。
囊蚴形態(tài)特點:橢圓形,平均大小為0.138mm×0.115mm,囊壁兩層,內(nèi)含幼蟲,可見口、腹吸盤及含有黑色顆粒的排泄囊。
蟲卵
(1) 蟲卵形態(tài)(固定標本)(操作)
從大小、形態(tài)、顏色、卵殼結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物等五個方面詳細觀察。
病理標本
1. 成蟲在肝膽道內(nèi)的大體標本(示教)。
2. 成蟲在肝膽道內(nèi)的病理組織切片(示教)。
膽道內(nèi)可見華支睪吸蟲成蟲橫切面,大量蟲卵散布在子宮腔內(nèi),膽管上皮細胞增生,呈乳頭狀突向管腔,膽管周圍纖維組織增生,壓迫肝實質(zhì)。
作業(yè)
二、 布氏姜片蟲(Fasciolopsis buski)
目的和要求
了解成蟲的基本形態(tài)和生活史的基本特點。
從成蟲的體積和腹吸盤的大小理解其機械致病作用。
掌握蟲卵特征和病原學(xué)診斷方法。
熟識植物媒介,掌握防治要點。
實驗內(nèi)容
(一)成蟲
成蟲液浸標本(示教)
成蟲染色標本(操作)
注意蟲體大小,背腹扁平肥厚,腹吸盤較口吸盤大4~5倍,肌肉相當發(fā)達。
(二)中間宿主、幼蟲和媒介(示教)
中間宿主:扁卷螺
尾蚴染色標本
囊蚴染色標本
(三)蟲卵
蟲卵形態(tài)(操作)
蟲卵大小約130~140μm×80~85μm,橢圓形,淡黃色,卵殼薄,卵蓋。ú幻黠@),卵內(nèi)含一個卵細胞和數(shù)十個卵黃細胞。
蟲卵掃描電鏡照片(示教)
(四)作業(yè):
三、并殖吸蟲(Paragonimus)
目的和要求
了解衛(wèi)氏并殖吸蟲的形態(tài)特征和生活史。
了解并殖吸蟲寄生部位和主要致病作用。
掌握衛(wèi)氏并殖吸蟲蟲卵的形態(tài)特征和病原學(xué)診斷方法。
衛(wèi)氏并殖吸蟲(Paragonimus westermani)
1. 成蟲
(1) 成蟲液浸標本(示教)
(2) 成蟲染色標本(操作)
① 外部形態(tài)
② 口、腹吸盤
③ 生殖器官:兩個睪丸位于蟲體后1/3,左右并列,卵巢與子宮并列于腹吸盤之后。
(3) 成蟲皮棘掃描電鏡照片(示教)
2. 幼蟲和中間宿主
(1) 第一中間宿主:川卷螺(示教)
(2) 尾蚴染色標本:尾部短小,呈圓球狀。(示教)
(3) 第二中間宿主:溪蟹、蟲刺蛄(示教)
3. 蟲卵
(1) 蟲卵形態(tài):(操作)
蟲卵呈金黃色,長橢圓形,形態(tài)常不規(guī)則,大小為80~118μm×48~60μm。卵殼厚薄不均,卵蓋大,常傾斜,卵內(nèi)含有一個未分裂的受精卵細胞和十多個卵黃細胞。
(2) 蟲卵掃描電鏡照片(示教)
4. 病理標本
(1) 肺吸蟲病肺臟病理標本:注意結(jié)節(jié)狀或半球狀突出的蟲囊(示教)。
(2) 肺吸蟲病肝臟病理標本:注意肝臟表面的窟穴狀或隧道狀病變(示教)。
斯氏貍殖吸蟲(Pagumogonimus skrjabini)
1. 成蟲液浸標本(示教)
2. 成蟲染色標本(示教)
3. 第一中間宿主:擬釘螺(示教)
作業(yè)
四、日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)
目的和要求
了解毛蚴、尾蚴及成蟲的形態(tài)和生活史特點。
通過動物實驗了解血吸蟲的感染期、感染途徑和致病作用。
掌握蟲卵形態(tài)特征和病原學(xué)診斷方法。
了解免疫學(xué)診斷方法和意義。
實驗內(nèi)容
成蟲
成蟲活體標本(示教)
成蟲雌雄合抱標本(示教)
成蟲染色標本(操作)
注意以下幾點:
雌雄成蟲的大小、形態(tài)。
口、腹吸盤,腹吸盤突出。
生殖器官:雌雄異體。
雄性生殖器官:睪丸數(shù)目、形態(tài)、位置和排列方式。
雌性生殖器官:卵巢、子宮(注意子宮內(nèi)有蟲卵)、卵黃腺。
幼蟲和中間宿主
1. 毛蚴
毛蚴掃描電鏡照片(示教)
2. 中間宿主:釘螺(示教)
3. 尾蚴
尾蚴染色標本:注意尾部分叉(示教)。
觀察活尾蚴(示教)。
靜止時尾蚴體部懸掛在水面,活動時體部伸縮,尾干作反復(fù)弧形擺動,尾叉作旋漿式轉(zhuǎn)動,使身體向前推進。
蟲卵
1. 日本血吸蟲蟲卵形態(tài):(操作)
蟲卵呈寬橢圓形,大小89μm ×67μm,淡黃色,卵殼薄而均勻,無卵蓋,有一小側(cè)棘。通常從糞便中排出的蟲卵,其卵殼周圍常有污物粘附。成熟蟲卵內(nèi)含有毛蚴。
致病作用
1. 病理標本
血吸蟲病肝硬化病理標本:肝表面有許多灰白色芝麻大小散在性分布的結(jié)節(jié),切面在靜脈周圍有灰白色樹狀纖維索。(示教)
(2) 血吸蟲病肝組織切片。
急性蟲卵結(jié)節(jié):蟲卵周圍有大量的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞浸潤及以蟲卵為 中心向四周發(fā)出的放射狀嗜酸性細棒狀物質(zhì)沉積。(示教)
慢性蟲卵結(jié)節(jié):蟲卵已死亡或鈣化,蟲卵周圍可見到上皮樣細胞,異物巨細胞聚集和纖維細胞增生等。(示教)
(3) 血吸蟲成蟲寄生在腸系膜的病理標本
2. 解剖實驗動物(家兔)(小班操作)
將感染血吸蟲尾蚴50天左右的家兔處死,剖開腹腔后注意觀察記錄下列內(nèi)容:
① 有無腹水?
② 肝臟有何變化?
腸壁有何變化?
在何處找到血吸蟲成蟲?
是否有異位損害現(xiàn)象?
腸組織壓片法檢查:取米粒大小的直腸粘膜組織,置玻片上,取另一玻片壓片檢查,可見蟲卵如何排列,并見到什么時期的蟲卵?
實驗診斷方法
1. 病原學(xué)檢查
糞便直接涂片法、毛蚴孵化法、透明法、直腸活組織檢查等,
2. 免疫診斷法
環(huán)卵沉淀試驗:(示教)
流行病學(xué)(示教)
晚期血吸蟲病人照片。
血吸蟲病流行區(qū)照片。
滅螺方法照片。
作業(yè)
絳 蟲(tapeworm)
目的和要求
了解帶絳蟲和其他絳蟲的基本形態(tài)和生活史特點。
掌握豬帶絳蟲、牛帶絳蟲的鑒別要點。
實驗內(nèi)容
帶絳蟲
成蟲
鏈狀帶絳蟲(豬帶絳蟲)(Taenia solium)液浸標本(示教)
肥胖帶絳蟲(牛帶絳蟲)(Taenia saginata)液浸標本(示教)
注意蟲體外形、長度、頭節(jié)和鏈體。
豬帶絳蟲頭節(jié)染色標本:呈圓球狀,具四個吸盤,頂端具頂突,頂突上有二圈小鉤。(操作)
牛帶絳蟲頭節(jié)染色標本:近似方形,具四個吸盤,無頂突和小鉤。(示教)
豬帶絳蟲成節(jié)染色標本(示教)
牛帶絳蟲成節(jié)染色標本(示教)
兩種絳蟲成節(jié)結(jié)構(gòu)大體相同。每個節(jié)片都有雌雄生殖器官,子宮呈管狀,無子宮孔,卵巢分兩葉,豬帶絳蟲卵巢另有一中央小葉,缺消化器官。
豬帶絳蟲孕節(jié)墨汁染色標本(示教)
牛帶絳蟲孕節(jié)墨汁染色標本(示教)
子宮兩側(cè)的分支數(shù)是鑒別兩種絳蟲的重要依據(jù),通常豬帶絳蟲孕節(jié)每側(cè)分支為7~13支,牛帶絳蟲為15~30支,枝端再分支。
幼蟲
豬帶囊尾蚴染色標本(示教)
牛帶囊尾蚴染色標本(示教)
兩種囊尾蚴頭節(jié)與成蟲頭節(jié)構(gòu)造相似,注意兩種囊尾蚴的鏡下鑒別。
豬囊尾蚴在豬心肌內(nèi)(示教)
豬囊尾蚴在豬腦組織及其他肌肉組織內(nèi)(示教)
(三)蟲卵(操作):
蟲卵呈球形或近球形,直徑31~43μm,卵殼甚薄,內(nèi)為胚膜。蟲卵自孕節(jié)散出后,卵殼多已脫落,成為不完整蟲卵。通常鏡檢所見的卵無卵殼,外有很厚胚膜,棕黃色,具放射狀條紋,內(nèi)含有六鉤蚴,新鮮卵的六鉤蚴可見6條關(guān)刀樣的小鉤。兩種帶絳蟲卵形態(tài)相似,鏡下不能區(qū)分。
曼氏迭宮絳蟲(spirometra mansoni)
成蟲
成蟲液浸標本(示教)
成蟲頭節(jié)染色標本:呈指狀,其背腹面各有一條縱行的吸槽。(示教)
成節(jié)染色標本:成節(jié)子宮呈螺旋狀盤曲,緊密重疊,似金字塔狀。(示教)
中間宿主及幼蟲(示教)
中間宿主-劍水蚤
裂頭蚴在第二中間宿主 ——蛙肌肉內(nèi)。
裂頭蚴長帶形,乳白色,約 300mm×0.7mm,頭部膨大,末端鈍圓,體前端無吸槽,中央有一明顯凹陷,是與成蟲相似的頭節(jié)。體不分節(jié)但具橫皺褶。
(三)蟲卵
蟲卵近橢圓形,兩端稍尖,大小為52~76μm×31~44μm,呈灰褐色,有卵蓋,殼較薄,內(nèi)有一個受精卵細胞和若干卵黃細胞。
(四)解剖青蛙找裂頭蚴(小組操作)
用小錐從枕骨大孔刺入,處死青蛙。使蛙腹朝上,四肢伸展,固定在解剖板上,剪開腹部皮膚,剝?nèi)ネ馄,在肌肉束間尋找裂頭蚴,觀察幼蟲的形態(tài)、顏色和活力。
細粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)
成蟲染色標本(示教)
棘球蚴在肝臟內(nèi)的液浸標本(示教)
原頭蚴染色標本:呈橢圓形,具吸盤和細鉤。(操作)
棘球蚴切片標本(示教)
外層是宿主組織的反應(yīng)物為假囊壁,真囊壁分為內(nèi)外兩層,外層為角皮層,無細胞結(jié)構(gòu),內(nèi)層為生發(fā)層(胚層),具細胞核和微粒物質(zhì),胚層長出原頭蚴。
作業(yè)
線 蟲(nematode)
一、似蚓蛔線蟲(蛔蟲)(Ascarislumbricoides)
目的和要求
以蛔蟲為例了解線蟲形態(tài)和生活史基本特點。
掌握蛔蟲卵形態(tài)特征。
了解蛔蟲對人體的危害。
實驗內(nèi)容
成蟲
雌雄成蟲液浸標本(示教)
成蟲為長圓柱體狀,中間稍膨大,兩端逐漸變細,新鮮蟲體呈淡紅色,固定后呈灰白色。體表有橫紋和兩條側(cè)線,雄蟲后端向腹部卷曲。
雌雄成蟲解剖標本(示教)
蛔蟲橫切面染色標本(示教)
注意下列結(jié)構(gòu):
體壁:表皮為角皮層,其下為皮下層和縱肌層,皮下層伸入原體腔內(nèi)并增厚,背腹及兩側(cè)分別形成四條縱索。
腸管:腸壁由單層柱狀上皮細胞組成。
原體腔:即體壁和消化道之間的腔隙,腔內(nèi)充滿液體,內(nèi)部器官,如生殖、消化器官浸浴其中。
蟲卵
受精蛔蟲卵(操作)
蟲卵呈短橢圓形,大小為45~75μm×35~50μm,卵殼很厚,通常表面有一層波浪式的蛋白質(zhì)膜,從糞便排出的蟲卵常被膽汁染成黃色或棕褐色,內(nèi)含有一個未分裂的受精卵細胞,與卵殼之間形成半月形間隙。
未受精蛔蟲卵(操作)
蟲卵呈長橢圓形或不規(guī)則形,大小為88~94μm×39~44μm,卵殼較薄,淡黃色,內(nèi)含有許多大小不一的屈光顆粒。
感染期蟲卵(示教)
卵內(nèi)含有一條卷曲的幼蟲。
受精卵和未受精卵的掃描電鏡圖。(示教)
(三)病理標本(示教)
蛔蟲性機械性腸梗阻病理標本。
蛔蟲成蟲在膽道內(nèi)的病理標本。
(四)作業(yè) 繪受精和未受精蟲卵形態(tài)圖。
二、毛首鞭形線蟲(鞭蟲)(Trichuris trichiura)
目的和要求
掌握鞭蟲卵的形態(tài)特征。
實驗內(nèi)容
鞭蟲成蟲液浸標本(示教)
蟲體后部粗大,前端細長狀似馬鞭。
蟲卵(操作)
蟲卵較小,50~54μm×22~23μm,紡錘形,黃褐色,卵殼較厚,卵殼兩端各有一個透明的塞狀突起—蓋塞,從糞便排出的新鮮蟲卵內(nèi)含有一個受精卵細胞。
鞭蟲成蟲咬附在腸壁上的病理標本。(示教)
作業(yè):
繪鞭蟲卵形態(tài)圖。
三、鉤蟲
十二指腸鉤口線蟲(十二指腸鉤蟲)(Ancylostoma duodenale)
美洲板口線蟲(美洲鉤蟲)(Necator americanus)
目的和要求
了解兩種鉤蟲形態(tài)的鑒別要點。
掌握蟲卵的形態(tài)特征。
掌握與致病作用有關(guān)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
了解鉤蟲病流行與自然因素和作物種植的關(guān)系。
實驗內(nèi)容
成蟲
成蟲液浸標本(示教)
蟲體呈乳白色或米黃色,前端向背側(cè)仰屈,雄蟲末端膨大形成交合傘。
雌雄成蟲交配標本(示教)
十二指腸鉤蟲口囊染色標本(示教)
注意口囊腹側(cè)有兩對鉤齒。
美洲鉤蟲的口囊染色標本(示教)
注意口囊腹側(cè)有一對板齒。
蟲卵(操作)
蟲卵橢圓形,兩端較圓,大小為36~40μm×56~76μm,殼很薄,無色透明,內(nèi)含2~8個卵細胞或多細胞期,若患者便秘或糞便放置過久,蟲卵細胞可繼續(xù)分裂為多細胞期,有時可見桑椹期甚至含蚴卵。卵殼與細胞間有明顯的空隙。十二指腸鉤蟲卵與美洲鉤蟲卵極為相似,不易區(qū)分。
2. 發(fā)育期蟲卵(示教)
卵內(nèi)含有2 、4 、8個細胞或桑椹期、含蚴蟲卵。
3. 蟲卵掃描電鏡照片(示教)
病理標本
成蟲咬附在腸壁上(示教)
注意腸粘膜表面的小潰瘍和出血點。
成蟲口囊咬附腸粘膜的組織切片(示教)
作業(yè)
繪鉤蟲蟲卵圖。
標注鉤蟲口囊形態(tài)圖。
四、蠕形住腸線蟲(蟯蟲)(Enterobius vermicularis)
目的和要求
掌握蟯蟲卵的基本形態(tài)和實驗室診斷方法。
實驗內(nèi)容
雌雄成蟲液浸標本(示教)
蟲體細小,乳白色,雌蟲尾端長而尖細,雄蟲尾部彎曲。
蟲卵(操作)
蟲卵大小為50~60μm×20~30μm,無色透明,兩側(cè)不對稱,一側(cè)偏平,一側(cè)稍凸,卵殼厚,內(nèi)含幼蟲。
生理鹽水棉簽拭子法(示教)
用生理鹽水濕潤棉簽輕拭肛門周圍或皺褶,把棉簽放入盛有飽和鹽水的西林瓶內(nèi)蕩洗,然后用浮聚法或沉淀法檢查蟲卵。
作業(yè)
繪蟯蟲卵圖。
五、絲蟲(filaria)
馬來布魯線蟲(馬來絲蟲)(Brugia malayi)
班氏吳策線蟲(班氏絲蟲)(Wuchereria bancrofti)
目的和要求
了解絲蟲生活史和流行病學(xué)特點。
掌握微絲蚴的基本形態(tài)。
了解病原學(xué)診斷方法。
實驗內(nèi)容
成蟲
馬來絲蟲成蟲液浸標本(示教)
班氏絲蟲成蟲液浸標本(示教)
犬惡絲蟲(Dirofilaria immitis)成蟲液浸標本(示教)
微絲蚴
馬來絲蟲微絲蚴染色標本(操作,示教)
班氏絲蟲微絲蚴染色標本(操作,示教)
注意蟲體外形、姿態(tài)、鞘膜、頭間隙的長寬比例、體核等,在示教標本中注意馬來絲蟲微絲蚴有尾核2個。
微絲蚴未染色標本(示教)
微絲蚴細長彎曲或卷曲,反光性強,頭端鈍圓,尾端尖細,觀察時光線不要太強。
班氏絲蟲臘腸期幼蟲在蚊的胸肌內(nèi)(示教)
班氏絲蟲感染期幼蟲在蚊喙內(nèi)(示教)
絲蟲中間宿主
致倦庫蚊(示教)
中華按蚊(示教)
作業(yè)
六、旋毛形線蟲(旋毛蟲)(Trichinella spiralis)
目的和要求
掌握幼蟲囊包的形態(tài)特點和病原學(xué)診斷方法。
通過動物實驗了解生活史和致病作用。
實驗內(nèi)容
幼蟲囊包染色標本(示教)
幼蟲囊包活體標本(示教)
作業(yè)
七、腸道寄生蟲病原學(xué)檢查
目的和要求
掌握常用糞便檢查方法。
自檢糞便、驅(qū)蟲。
實驗內(nèi)容
(一)糞便直接涂片法(示教)
在玻片上滴生理鹽水一滴,用竹簽挑取米粒大小糞便均勻涂片,蓋上蓋玻片,置低倍鏡下檢查。
注意: (l) 糞便量要適中。糞便過多,則涂片太厚不利于觀察;糞便太少,則涂片薄影響檢出率。制好的涂片以透過水膜能隱約看到課本的字體為適宜。
(2) 糞便中含有各種植物細胞,酵母菌、花粉、植物纖維和未完全消化的食物殘渣等,容易與蟲卵混淆,必須注意鑒別。
(3) 制好的涂片不能干燥,否則不易辨認蟲卵。
(二)飽和鹽水浮聚法(示教)
取糞便約黃豆大小置小玻璃瓶內(nèi),先加入少許飽和鹽水,將糞便攪成糊狀,再加飽和鹽水至滿,蓋上載玻片使液面與玻片接觸,如有糞渣或氣泡必須除去。靜置20分鐘后,小心翻轉(zhuǎn)取下玻片,擦干玻片下面的水份。置鏡下檢查。
醫(yī)學(xué)原蟲(medicalprotozoan)
溶組織內(nèi)阿米巴和其它阿米巴
目的和要求
掌握溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體和包囊的形態(tài)特點。
掌握溶組織內(nèi)阿米巴常用診斷方法。
理解溶組織內(nèi)阿米巴的致病作用。
掌握溶組織內(nèi)阿米巴與結(jié)腸阿米巴形態(tài)鑒別要點。
實驗內(nèi)容
一、溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoeba histolytica)
滋養(yǎng)體(trophozoite)
(l) 鐵蘇木素染色標本(操作和示教)
先用高倍鏡找到蟲體,然后用油鏡觀察,或直接用油鏡尋找。蟲體外質(zhì)透明,可見舌狀或指狀偽足,內(nèi)質(zhì)呈顆粒狀,顆粒細小而均勻,內(nèi)有一個核,圓形,核膜內(nèi)緣的染色質(zhì)粒大小較一致,排列整齊,核仁小而圓,位于中央。部份滋養(yǎng)體內(nèi)質(zhì)含有紅細胞,紅細胞的形態(tài)隨消化程度不同而異。有些滋養(yǎng)體內(nèi)質(zhì)還含有空泡。
包囊(cyst)
鐵蘇木素染色標本(操作和示教)
包囊呈圓球形,染成藍黑色。囊壁厚,不著色。核通常1 ~4個,成熟包囊具4個核,核結(jié)構(gòu)與滋養(yǎng)體相同,糖原泡在染色時被溶解,成為空泡,擬染色體深藍色,棒狀,兩端較鈍圓。成熟包囊常缺擬染色體。
(2) 碘液染色標本(操作和示教)
挑取少許糞便制成涂片,加上蓋玻片,在蓋玻片旁邊滴一滴碘液(碘液不宜過多),使碘液慢慢摻到糞液中,置高倍鏡下觀察。
染色后包囊呈棕黃色,圓球形,囊壁不著色,發(fā)亮。核呈小圓圈狀、糖原泡著色較深,邊界不明顯。擬染色體呈亮捧狀。
3. 病理標本
(l) 腸阿米巴病理標本(示教)
腸壁潰瘍呈散在性分布,大小不一,病變中央組織缺損,周圍組織水腫而隆起,形成火山口樣。多個潰瘍?nèi)诤虾螅股賶K腸粘膜組織壞死、脫落,形成淺表潰瘍。潰瘍口小底大,潰瘍之間仍可見到正常組織。
(2) 腸阿米巴病理組織切片(示教)
在潰瘍周圍組織可見到滋養(yǎng)體、大量白細胞浸潤。經(jīng)HE染色,滋養(yǎng)體染成桃紅色,胞核和吞噬的紅細胞染成深桃紅色。
(3) 阿米巴肝膿腫病理標本(示教)
膿腫多發(fā)生在肝右葉,常為單個,膿腔周圍組織壞死,使腔壁不整齊,呈棉絮狀。
結(jié)腸內(nèi)阿米巴(Entamoeba coli)
包囊鐵蘇木素染色標本(示教)
較溶組織內(nèi)阿米巴的包囊大,圓球形,胞核1~8個,核構(gòu)造和滋養(yǎng)體相似。擬染色體的兩端不整齊似碎片狀或草束狀。
腔道內(nèi)其他非致病性的阿米巴(示教)
1. 齒齦內(nèi)阿米巴(E.gingivalis)滋養(yǎng)體
蟲體小,僅有滋養(yǎng)體時期,內(nèi)質(zhì)和外質(zhì)的界限分明,食物泡內(nèi)含有細菌、白細胞等物,偶有紅細胞,核仁居中,有核周染色粒。
2. 微小內(nèi)蜒阿米巴(E.ndolimax nana)
滋養(yǎng)體:新鮮標本直接涂片中蟲體細小。運動緩慢,可有多個偽足。胞核一個,內(nèi)外質(zhì)不分明,內(nèi)質(zhì)粗糙,含有細菌。有一粗大明顯核仁,無核周染色質(zhì)粒。
包囊:較溶組織阿米巴細小,類圓形或橢圓形,核1~4個,核仁粗大而不規(guī)則,核膜薄,無核周染色質(zhì)粒,缺擬染色體。
3. 布氏嗜碘阿米巴(Iodamoeba buetschlii)
滋養(yǎng)體:蟲體細小,新鮮標本生理鹽水涂片中偽足寬大,運動緩慢。食物泡內(nèi)含有細菌,染色標本中核仁大而且居中央,核膜內(nèi)緣的染色質(zhì)粒不明顯。
(四)作業(yè)
二、藍氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia)
目的和要求
掌握滋養(yǎng)體和包囊的形態(tài)特征。
了解病原學(xué)診斷方法。
實驗內(nèi)容
滋養(yǎng)體鐵蘇木素染色標本(操作)
正面觀似半個縱切的倒置梨形,側(cè)面觀呈瓢狀。兩側(cè)對稱,背面隆起,腹面前半部向內(nèi)凹陷形成左右兩葉吸盤,每葉吸盤的背側(cè)備有一個圓形的泡狀細胞核。一對軸柱縱貫蟲體,中部有2個半月狀中體。鞭毛4對,按伸出蟲體的部位分前側(cè)鞭毛、后側(cè)鞭毛、腹鞭毛和尾鞭毛各一對。
2. 包囊鐵蘇木素染色標本(操作)
包囊呈卵圓形,囊壁很厚,不著色。兩對核偏于一端,核仁清晰,并可見到鞭毛、軸柱及絲狀物。
藍氏賈第鞭毛蟲吸附在腸粘膜表面的掃描電鏡圖(示教)
4.作業(yè)
三、陰道毛滴蟲(trichomonas vaginalis)
目的和要求
掌握陰道毛滴蟲的形態(tài)。
實驗內(nèi)容
1. 陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體染色標本(操作)
蟲體呈梨形或橢圓形,軸柱貫穿蟲體并從末端伸出,蟲體前1/3處可見一個橢圓形胞核,從蟲體前緣發(fā)出4根前鞭毛和1根后鞭毛。體外側(cè)前1/2處有一波動膜,其外緣與向后延伸的后鞭毛相連。胞質(zhì)內(nèi)可見深染、顆粒狀的氫化酶體。
陰道毛滴蟲活滋養(yǎng)體(示教)
活滋養(yǎng)體呈無色透明狀,有折光性,體態(tài)多變,活動力強。
3. 作業(yè):繪陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體圖。
四、瘧原蟲(malariaparasite)
目的和要求
學(xué)習(xí)瘧原蟲生活史,理解瘧原蟲的致病機理。
掌握瘧原蟲病原學(xué)診斷方法及瘧原蟲的鑒別要點。
初步了解瘧原蟲的媒介—按蚊。
認識瘧疾的防治要點。
實驗內(nèi)容
紅細胞內(nèi)期瘧原蟲
1. 間日瘧原蟲(Plasmodium vivas)(操作和示教)
(1) 環(huán)狀體: 纖細環(huán)狀,直徑約占紅細胞的l/3。染色后胞質(zhì)藍色,有一深紅色的核, 中間為空泡,形似紅寶石戒指。
(2) 滋養(yǎng)體:核略增大,形態(tài)視發(fā)育時間和活動情況而多變,可見偽足,胞質(zhì)內(nèi)有黃棕色煙絲狀瘧色素,被寄生的紅細胞略脹大,染色變淡,并出現(xiàn)淡紅色的薛氏點。
(3) 裂殖體:早期裂殖體只見核分裂而無胞質(zhì)分裂。成熟裂殖體含12~24個橢圓形裂殖子,排列不規(guī)則,瘧色素集中在中央。蟲體占滿脹大的紅細胞。
(4) 配子體
雄配子體:圓形,略大于正常紅細胞,胞質(zhì)色藍略帶紅,核疏松,淡紅色,位于中央,瘧色素分散。
雌配子體:圓形,占滿脹大的紅細胞,胞質(zhì)藍色,核結(jié)實,較小,深紅色,偏于一側(cè),瘧色素分散。
2. 惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)(操作和示教)
(1) 環(huán)狀體:(需與間日瘧原蟲比較)
蟲體小,直徑約為紅細胞的1/5,常見多個蟲體寄生在一個紅細胞內(nèi),且有蟲體寄生在紅細胞的邊緣,一個蟲體有2個核較常見。
(2) 配子體
雄配子體:臘腸形,兩端鈍圓,胞質(zhì)色藍略帶紅,核位于中央,疏松、淡紅色,瘧色素黃棕色,小桿狀,在核周圍較多。
雌配子體: 新月狀,兩端較尖。胞質(zhì)藍色。核位于中央,結(jié)實,較小,深紅色。瘧色素深褐色,多在核周圍。
(二)紅細胞外期瘧原蟲(示教)
1. 蚊體內(nèi)發(fā)育的瘧原蟲。
2. 卵囊:圓球形或橢圓形,內(nèi)含有許多子孢子。
3. 子孢子:梭形,兩端尖細,大小約為1×8μm,姬氏染色核紅色,胞質(zhì)天藍色。
(三)鼠瘧原蟲(伯氏瘧原蟲 Plasmodium berghei)接種實驗(小組操作)
取已感染鼠瘧原蟲的小白鼠一只,從眼眶、尾巴或心臟取血0.2ml,用生理鹽水稀釋到1ml,搖勻。用結(jié)核菌素注射器吸取0.1ml稀釋的含原蟲血液,在無菌操作的條件下,給健康小白鼠作腹腔內(nèi)注射。感染后,作標記并置飼養(yǎng)籠內(nèi)喂養(yǎng),留待下周實驗使用。
六、機會性致病原蟲 (Opportunistic protozoan)
目的和要求
了解機會致病原蟲常見蟲種及其形態(tài)特點。
通過動物實驗理解這一類原蟲的致病條件,以及宿主免疫功能在發(fā)病過程中的重要性。
實驗內(nèi)容
(一)卡氏肺孢子蟲 (Pneumocysis carinii)
1. 染色標本(示教)
滋養(yǎng)體:外形多變,大小2~5μm。一個核染成深紫色,胞質(zhì)淺藍色。
包囊:呈球形,直徑約4~6μm,內(nèi)有新月狀子孢子8個。
(二、)隱孢子蟲(Cryptosporidium)
卵囊染色標本(示教) 檢材取自腹瀉患者的糞便。卵囊呈圓形或橢圓形,大小約7.4×5.6μm,內(nèi)有4個裸露的子孢子和一團殘留體。
(三)剛地弓形蟲(Toxoplasma)
1. 速殖子和假包囊染色標本(示教)
檢材取自急性感染小白鼠的腹腔滲出液。蟲體大小為4~7×2~4μm,一端較鈍圓, 一端較尖細,一側(cè)扁平,一側(cè)較彎。胞質(zhì)染成藍色,胞核染成紅色。
假包囊為巨噬細胞內(nèi)含有多個速殖子的集合體,宿主細胞核常被擠向一邊。
2. 包囊染色標本(示教)
檢材取自慢性感染小白鼠的腦組織。包囊呈圓形或卵圓形,大小差別很大(直徑5~100μm)囊壁不著色,內(nèi)含數(shù)個或數(shù)千個緩殖子(酷似速殖子)。
醫(yī)學(xué)節(jié)肢動物(medical arthropod)
蚊(mosquito)
目的和要求
1. 通過了解蚊蟲生活史各期形態(tài)特征,了解昆蟲綱昆蟲的共同特征。
2. 了解昆蟲與傳病的關(guān)系。
3. 了解按蚊、庫蚊、伊蚊的鑒別要點。
實驗內(nèi)容
(一) 三屬蚊活標本(示教)
1. 按蚊屬(Anopheles)
2. 庫蚊屬(Culex)
3. 伊蚊屬(Aedes)
注意蚊體色,翅上斑點及靜態(tài)。
按蚊:體灰色,無斑,通常翅有黑色和白色鱗片形成黑白斑。靜止時喙與身體成一直線與停留面成銳角。
伊蚊:體多為黑色,間有白紋,足有白環(huán),翅無斑點。靜止時喙與身體成鈍角,身體與停留面平行。
庫蚊:體多為棕色,無斑。靜止時喙與身體成鈍角,身體與停留面平行。
(二) 三屬蚊針插標本(小班示教)
1. 按蚊針插標本
2. 庫蚊針插標本
3. 伊蚊針插標本
用放大鏡觀察蚊的頭、胸、腹三部。
頭部:近似球形,有一對復(fù)眼、觸角、觸須和一根粗長的喙。
注意觸須和喙上的黑白斑或白環(huán)。如三帶喙庫蚊的喙中段有一寬闊白環(huán)。
胸部:有細長分節(jié)的足三對,狹長的翅一對。按蚊翅前緣有黑白斑。白紋伊蚊在中胸盾片上有一正中的白色縱紋。
腹部:分10節(jié)。注意背板后緣的白色橫帶(見于庫蚊)。
(三)蚊蟲頭部標本
1. 按蚊頭部玻片標本(操作)
復(fù)眼:位于頭部前方兩側(cè)
觸角:鞭狀,共15節(jié),向兩端伸出,每節(jié)有輪毛。雄蚊輪毛長而密,雌蚊輪毛疏短。
觸須:雄蚊和雌蚊的觸須與喙幾乎等長,雄蚊的觸須末端膨大。
喙:呈細管狀,由下唇和口器組成。下唇背面凹入形成鞘狀結(jié)構(gòu),口器藏于其內(nèi)。唇末端有兩個小唇瓣。口器為刺吸式,由六根刺針組成,包括上內(nèi)唇及舌各一個,上顎及下顎各一對。
2.庫蚊頭部標本(示教)
雌蚊和雄蚊除觸角輪毛不同外,雌蚊觸須較喙短,雄蚊觸須較喙長。
(四)三屬蚊卵活標本(示教)
注意各種不同蚊卵在水中的不同分布狀態(tài)和排列。
按蚊卵:外形似小艇狀,中部兩側(cè)有浮囊,分散在水面上。
庫蚊卵:長圓形,一端較粗,互相集結(jié)呈竹筏狀,浮在水面。
伊蚊卵:紡錘形,分散,常沉在水底。
(五)三屬蚊幼蟲活標本觀察(示教)
按蚊:尾端無呼吸管,只有一對氣門,腹部背面有掌狀浮毛,靜止時體與水面平行。
庫蚊:尾端有一長而細的呼吸管,靜止于水面時頭下垂,身體與水面成一角度,倒掛在水中。
伊蚊:尾端的呼吸管短而粗,靜止于水面時體態(tài)如庫蚊。
(六)蛹活標本觀察(示教)
體形呈逗點狀,分頭胸和腹部,胸背部有喇叭型呼吸管一對。
(七)蟲孳生環(huán)境和棲息場所照片(示教)
(八)蚊與疾病的關(guān)系
傳播瘧疾
卵囊在蚊胃壁下標本(示教)
子孢子在按蚊涎腺內(nèi)染色標本(示教)
傳播絲蟲病
絲蟲感染性幼蟲在庫蚊下唇標本(示教)
傳播登革熱
登革熱病毒在白紋伊蚊涎腺內(nèi)照片(示教)
作業(yè) 如何鑒別三屬蚊?
二、蠅(Fly)
成蠅
1. 舍蠅(家蠅)(Musca domestica vicina)針插標本(操作)
體分頭、胸、腹三部。
胸部有翅1對,足3對,胸背有4條黑色縱紋。
2. 大頭金蠅(Chrysomyia megacephala)(示教)
體具金屬光澤,呈青綠色,復(fù)眼大、深紅,頰部橙黃色,體胖,頭部比胸部寬。
3. 麻蠅(Sarcophagidae)(示教)
體灰黑色,胸背部具3條黑色縱紋,腹背部有黑白相間的棋盤狀斑塊。
4. 成蠅口器(操作)
舐吸式口器,由基喙,中喙和唇瓣組成。唇瓣一對,橢圓形,其內(nèi)有許多氣管樣構(gòu)造。
5. 成蠅足(示教)
足部多毛,末端有爪及爪墊各一對,爪墊多細毛,并能分泌粘液。
6. 蠅的吐滴習(xí)性觀察(示教)
取成蠅3~5只,放入干凈玻璃罩內(nèi),半小時后觀察罩壁上的蠅吐出的污物。
三、蚤、虱和其它節(jié)肢動物
蚤(Flea)
蚤成蟲(示教)
體呈黃褐色,分節(jié),短小,兩側(cè)稍扁平,全身有許多向后生長的鬃和刺,有些蚤的頰部和前胸后緣有黑色堅硬粗壯的刺,稱為頰節(jié)或前胸節(jié)。刺吸式口器,無翅,足三對,很發(fā)達。
虱(Lice)
1. 人虱(Pediculus humanus)成蟲固定標本(示教)
灰白色或灰色,體背腹扁平,分頭、胸、腹三部。頭略作錐形,黑眼一對,刺吸式口器,足三對,短,跗節(jié)末端有一爪與脛節(jié)末端的脛突相對形成攫握器,緊握宿主的頭發(fā)或衣服纖維。一般認為人虱又分為兩個亞種:人頭虱(P. h. capitis)和人體虱(P. h. corporis)
2. 恥陰虱(Pthirus pubis)
長寬接近,但腹部寬度大于長度,形似蟹。
3. 虱卵粘附在毛發(fā)上(示教)
長圓形,黃白色,一端有卵蓋。
(四)蜚蠊(蟑螂)(Cockroach)
1. 美洲大蠊(Periplaneta americana)成蟲標本(示教)
成蟲蟲體較大,橢圓形,背腹扁平,體呈紅褐色,體表有油亮光澤。前胸背部有一黑褐色蝶狀斑,斑的中線向后延伸成一“小尾”,中線前方有一“T”形黃色條紋,翅發(fā)達。
2.德國小蠊(Blattella germanica)成蟲制作標本(示教)
體小,茶褐色,前胸背板有兩條平行的黑色縱紋。
3.卵莢
暗褐色,形似紅豆,鞘殼堅硬,外有縱紋,卵成對排列在鞘內(nèi)。
(五)螨(Mite)
1. 疥螨(Sarcoptes )
&nbpayment-defi.comsp; 疥螨玻片標本(示教)
蟲體小,短橢圓形,背面有波狀皺紋和長短不一的剛毛和刺,足4對,短,
雌雄成螨前兩對足末端均有長柄吸墊。
3. 蠕形螨(Demodex )
成蟲玻片標本(示教)
體長,呈蠕蟲狀,乳白色,軀體分足體和末體兩部分,末體表有環(huán)狀橫紋。毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum)較長,足體約占軀體的1/3,足4對,末體占體長的2/3。皮脂蠕形螨(D. brevis)略短,足體約占體長的1/2。
蠕形螨檢查(小班為單位安排)
取一定大小的單面透明膠,在睡前貼在鼻尖、左右兩側(cè)的鼻翼、鼻唇溝等部位,次日起床后揭開,貼附在干凈載玻片上,置鏡下找蟲。