實驗七 細(xì)菌的變異
細(xì)菌和一般生物一樣，也具有遺傳性和變異性。細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下，其性狀相對穩(wěn)定，傳給后代，維持其種屬的特性稱細(xì)菌的遺傳性。而細(xì)菌子代與親代生物學(xué)性狀上存在程度不同的差異，稱為變異。在一定環(huán)境條件下細(xì)菌遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變，將會引起細(xì)菌的性狀發(fā)生改變，分為表型變異與基因型變異。如L型細(xì)菌的變異，表現(xiàn)為細(xì)菌細(xì)胞壁的缺陷。有的細(xì)菌從有鞭毛到失去鞭毛的變異，亦稱H-O變異。
研究細(xì)菌的變異性有助于疾病的診斷、預(yù)防、治療。
（一)細(xì)菌的L型變異
【原理】
細(xì)菌被溶菌酶水解或被抗生素(如青霉素)阻止肽聚糖合成后，都將失去細(xì)胞壁，在滲透壓平衡的培養(yǎng)基中，革蘭陽性菌呈原生質(zhì)體，革蘭陰性菌呈圓球體，若繼續(xù)生長和分裂，則稱為L型菌。若處于低滲環(huán)境中，細(xì)菌將膨脹和破裂。
【材料】
1．L型培養(yǎng)基 牛肉浸液800ml，蛋白胨20g，氯化鈉50g，無菌人血漿200ml，瓊脂8g，pH7.4，常規(guī)高壓滅菌，傾注平板時加入無菌血漿。
2．新青霉素Ⅱ藥物濾紙片，每片含藥為40µg。
3．革蘭氏染色液和細(xì)胞壁染色液。
4．金黃色葡萄球菌肉湯培養(yǎng)物。
【方法】
1．于L型培養(yǎng)基內(nèi)均勻涂布0.05ml金黃色葡萄球菌肉湯。取青霉素藥片1張貼于平板中央，置37℃培養(yǎng)。
2．低倍鏡下逐日觀察濾紙片周圍抑菌圈內(nèi)有無油煎蛋狀小菌落(即L型菌落)出現(xiàn)。
3．取L型菌落和原菌(作對照)涂片，均分別作革蘭染色和細(xì)胞壁染色，油鏡觀察。
【結(jié)果】
抑菌圈內(nèi)可有油煎蛋狀小菌落，染色后可見L型菌呈多形性和細(xì)菌壁缺陷現(xiàn)象。與正常菌明顯不同。
（二)變形桿菌的鞭毛變異
【材料與方法】
l．取變形桿菌18～24h普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，分別點種于0.1%石炭酸瓊脂平板和普通平板邊緣處，切勿劃開。
2．置37℃培養(yǎng)24h后，觀察和payment-defi.com/yishi/比較兩種培養(yǎng)基上變形桿菌生長情況。
【結(jié)果】
0.1%石炭酸培養(yǎng)基上變形桿菌只在點種處生長，而普通培養(yǎng)基上變形桿菌呈遷移性生長。
（三)細(xì)菌的耐藥性變異
【原理】
細(xì)菌的耐藥性可以由非遺傳性的生理性適應(yīng)引起，當(dāng)藥物除去后，細(xì)菌耐藥性消失；也可以通過下列三種遺傳性機理中的任何一種獲得耐藥性．即基因突變、重組和獲得帶有耐藥基因質(zhì)粒。這三種類型，除去藥物后，細(xì)菌仍然具有耐藥性，而且可以遺傳。
【材料】
1．普通瓊脂平板。
2．含青霉素(10～15u/m1)瓊脂平板。
3．金黃色葡萄球菌敏感株和耐藥株。
【方法】
1．將普通瓊脂平板分為兩半，分別接種金黃色葡萄球菌青霉素耐藥株和敏感株。
2．在含青霉素的平板上，同法接種上述2個菌株。
3．置37℃培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。
【結(jié)果】
普通平板上，2株細(xì)菌均長出菌落；含青霉素平板上，只有耐藥株長出菌落。
（四)細(xì)菌光滑型與粗糙型的變異
【原理】
細(xì)菌菌落有光滑型(smooth,S)和粗糙型(rough,R)。S-R變異是一種全面的變異，除菌落形態(tài)不同外，其生化反應(yīng)性、毒力和免疫原性等也往往發(fā)生改變。
【材料】
1．5%石炭酸溶液。
2．普通瓊脂平板。
3．S型和R型大腸桿菌18～24h培養(yǎng)物。
【方法】
l．大腸桿菌粗糙型醫(yī)學(xué)全.在線payment-defi.com的誘變 將5%石炭酸溶液加于瓊脂平板培養(yǎng)基中，使終濃度達(dá)到0.05～0.1%。接種S型大腸桿菌于平板上，37℃培養(yǎng)24h后，取單菌落轉(zhuǎn)種于另一上述平板，連續(xù)傳五、六代即可變?yōu)镽型。
2．將S型和R型大腸桿菌，分別接種于2個瓊脂平板上。
3．置37℃培養(yǎng)24h后，仔細(xì)觀察比較兩型菌落特點。
【結(jié)果】
平板上，S型菌落表面光滑、邊緣整齊、濕潤；R型菌落表面粗糙、邊緣不整齊、干皺。
