臨床免疫學及檢驗授課教案-實驗課教案:ELISA檢測乙肝兩對半

教研室

臨床免疫檢驗

課程

名稱

免疫學及檢驗

學時

4

檢驗專業(yè)2003 級   1、2、3班

帶教時間

2006 年10月12 日---2006   年  10月 13 日

教師

姓名

王慧

職稱

主管技師

實檢（見習)項目

ELISA檢測乙肝兩對半

本次實驗

（見習)

目的、

要求

1．掌握ELISA法檢測“二對半”的原理、操作過程及注意事項

2．熟悉檢測“二對半”的臨床意義。

內(nèi)容與安排

學時

一、介紹本次實驗、見習的重點及安排

（實驗課應包括：1、實驗標本的采集，2、實驗操作步驟，

3、實驗操作過程注意事項，4、實驗結(jié)果的評價及臨床意義)

1、簡介什么是“二對半”，為什么不檢測HbcAg？

2、檢測試劑盒的組成：主要介紹ELISA法的3種必備試劑，同時復習與理論相關內(nèi)容

必備試劑

① 固相抗原或抗體------免疫吸附劑
 ② 酶標記的抗原或抗體------酶結(jié)合物
 ③ 酶反應的底物------底物

3、實驗前準備：配制洗滌液

4、加樣

5、溫育

6、洗滌

7、顯色

8、結(jié)果判斷：比色法、目測法

9、注意事項：

1)標本的采取和保存：大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應。

抗凝不完全的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。

2)加樣：加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。

3)保溫：為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。

4)洗滌：。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或

抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

10、臨payment-defi.com床意義

10、學生分組試驗

二、討論思考題：

1、底物A、B液成分？顯色原理？

2、ELISA試驗中，什么是鉤狀效應？為什么HbsAg含量高會造成假陰性結(jié)果？

3、ELISA試驗中哪些因素會造成結(jié)果出現(xiàn)假陰性？哪些因素會造成結(jié)果出現(xiàn)假陽性？

3、ELISA檢測“乙肝二對半”臨床九種常見模式的臨床意義？

三、小結(jié)要點

1、實驗操作情況

2、注意洗滌要充分，拍板要干凈

四、布置學生作業(yè)內(nèi)容

1、書寫實驗報告(包括：實驗目的、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項、、方法學評價、實驗結(jié)果、結(jié)果分析及結(jié)論、討論)

2、思考題

五、下次實驗（見習)課預習范圍及后續(xù)程介紹

下次實驗課內(nèi)容為：循環(huán)免疫復合物的檢測

預習內(nèi)容：什么是III型變態(tài)反應？

4學時payment-defi.com/yaoshi/

教案制定時間：  2006  年 月  日   帶教老師簽名：王慧

專業(yè)主任審閱意見；

  簽名：  年   月   日