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第1次課 授課時間：2006年 月 日
課程名稱 | 年級 | 05級 | 專業(yè)、層次 | 臨床醫(yī)學(xué)等各專業(yè)本科 | ||||
授課教師 | 鄔于川 | 職稱 | 副教授 | 課型（大、小) | 小 | 學(xué)時 | 3 | |
授課題目 | 實驗室規(guī)則、自作小吞噬實驗（一) | |||||||
基本教材及 主要參考書 | 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗指導(dǎo) 鄔于川主編 瀘州醫(yī)學(xué)院印刷廠2002 P2~3 現(xiàn)代免疫學(xué)實驗技術(shù) 沈關(guān)心、周汝麟主編 湖北科學(xué)技術(shù)出版社 1998 | |||||||
目的與要求： 1、掌握小吞噬實驗的原理、方法； 2、熟悉實驗室規(guī)則 | ||||||||
教學(xué)內(nèi)容與時間安排： 實驗室規(guī)則 15min 自作小吞噬實驗（一) 小吞噬實驗的原理、方法 ---65min 教學(xué)方法：講授、板書、示教 | ||||||||
教學(xué)重點及如何突出重點、難點及如何突破難點： 教學(xué)重點 小吞噬實驗的原理、方法 教學(xué)難點 小吞噬實驗的方法（取血、制片、染色) 提示：取血要精準(zhǔn)，防止凝血；制片要自然干燥并固定，防止細(xì)菌變形或被沖掉；染色要規(guī)范操作，盡量使視野干凈，染色性好。 | ||||||||
教研室審閱意見： 教研室主任簽名： 年 月 日 | ||||||||
基本內(nèi)容 | 教學(xué)手段 | 課堂設(shè)計和時間安排 |
板書提綱 一、實驗室規(guī)則 二、自作小吞噬實驗（一) （一)原理 小吞噬細(xì)胞（中性粒細(xì)胞)＋金黃色葡萄球菌 （二)材料與方法 豚鼠抗凝血＋金黃色葡萄球菌懸液 混勻 37℃恒溫箱靜置分層
吸取白細(xì)胞層
制片
Right染色： 瑞氏染液數(shù)滴 1分鐘 加等量PB液 5～8分鐘 水沖洗，干燥后油鏡下觀察 教學(xué)進(jìn)程 分組 一 實驗室規(guī)則 （一)樹立有菌觀念，進(jìn)入實驗室前必須穿好工作服； （二)不能帶與實驗無關(guān)的物品進(jìn)入實驗室，更不允許在實驗室內(nèi)就餐； （三)介紹實驗室環(huán)境； （四)在實驗過程中要認(rèn)真細(xì)致； （五)實驗儀器設(shè)備若有損壞，須照價賠償； （六)值日同學(xué)必須切實做好實驗室的清潔； （七)如實驗過程中進(jìn)行了有菌操作，實驗結(jié)束后須用清潔液泡手3～5分鐘。 二 小吞噬實驗（一)——（中性粒細(xì)胞的吞噬作用) （Phagocytosis of neutrophilic granulocyte) 【原理】 本實驗將中性粒細(xì)胞與可被吞噬而又易于計數(shù)的顆粒物質(zhì)（如金黃色葡萄球菌)混合孵育一定時間后，顆粒物質(zhì)被中性粒細(xì)胞吞噬。計算吞噬率和吞噬指數(shù)，因此，反映該細(xì)胞的吞噬功能。 【材料】 ⒈ 豚鼠。 ⒉ 葡萄球菌懸液。 ⒊ 3.8%枸櫞酸鈉溶液、無菌注射器和針頭、試管、毛細(xì)吸管、瑞氏染料、載玻片等。 【方法】 ⒈ 采集豚鼠心臟血1~2ml或取人外周抗凝血2ml，加入到裝有3.8%枸櫞酸鈉0.2ml的試管中，迅速混勻。 ⒉ 加入葡萄球菌懸液一滴，混勻。37℃恒溫箱內(nèi)靜置30~60分鐘。 ⒊ 用毛細(xì)吸管從白細(xì)胞層（即沉淀的紅細(xì)胞表面)吸取白細(xì)胞懸液，加一滴于載玻片一端，作推片，自然干燥。 ⒋ Wright 染色： ⑴ 標(biāo)本自然干燥后，加瑞氏染液2~3滴于標(biāo)本的涂膜上，染色1分鐘。 ⑵ 加等量PBS與染液混合均勻，染色5~8分鐘。 ⑶ 沖去染液。水沖時為防止染液粘附于涂膜，不能先傾倒掉染液，而要邊沖邊慢慢傾斜載玻片，直至染液沖盡。 ⑷ 干燥后放玻片盒，以備下次實驗課觀察 清潔衛(wèi)生安排 | 講授 ――――― ---板書 ――――― 講授 板書 示教 ――――― 講授 板書 示教 | 約20min ---約5min 約50min 以上內(nèi)容可先組織操作，再講解，共耗時約50min ――――――――－ 約40min 約5min |
小 結(jié) | 1、小吞噬原理 2、推片方法 3、瑞氏染色方法 4、免疫學(xué)實驗基本特點 |
復(fù) 習(xí) 思 考 題 、 作 業(yè) 題 | 1 在本實驗中，影響中性粒細(xì)胞吞噬指數(shù)的實驗因素有哪些？ 2 為什么吞噬細(xì)胞是機(jī)體抗感染的重要防線？如果吞噬功能喪失， 對機(jī)體有什么影響？ 3 檢測吞噬細(xì)胞的吞噬作用是否全面反映機(jī)體的吞噬功能？為什么？ |
下 次 課 預(yù) 習(xí) 要 點 | 一、 小吞噬實驗（二) 二、 溶菌酶實驗 三、 血液細(xì)胞的形態(tài)與染色 |
實 施 情 況 及 分 析 |
