實(shí)習(xí)八 蔬菜中胡蘿卜素的測(cè)定（紙層析法)
1、原理：
蔬菜的植物色素包括葉綠素、葉黃素及胡蘿卜素等，它們能被丙酮、石油醚溶液提取出來。將樣品提取液進(jìn)行紙上層析，由于胡蘿卜素極性最小，故被石油醚洗走速度最快，從而可將胡蘿卜素與其它色素分開，然后將胡蘿卜素層析帶洗脫進(jìn)行比色定量。
2、試劑：
(1)石油醚（沸程60～90℃．，分析純)
(2)丙酮（分析純)
(3)丙酮-石油醚溶液(3：7)：以三分丙酮、七份石油醚振搖混合。
(4)無水硫酸鈉（分析純)
(5)5%硫酸鈉溶液
(6)}胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取純?chǔ)?胡蘿卜等50mg，溶于數(shù)毫升氯仿中，然后以石油醚稀釋至100ml，其濃度為0.50mg/ml。將此溶液稀釋10倍，即得50μg／ml的胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。冷暗處保存。
(7)層析：
圖3 點(diǎn)樣示意圖
圖4 層析裝置
a、點(diǎn)樣：準(zhǔn)確吸取待檢液0.1—0.2ml(醫(yī)學(xué)三基隨胡蘿卜素含量而定)在濾紙下端基線上A、B兩點(diǎn)之間或C、D兩點(diǎn)之間迅速來回進(jìn)行帶狀點(diǎn)樣（見圖3)-次點(diǎn)完。每個(gè)樣品點(diǎn)兩帶作為平行樣。
b、展開:將點(diǎn)好樣的濾紙卷成圓筒狀，固定兩邊，放入事先飽和了石油醚蒸氣的層析缸內(nèi)，進(jìn)行上行展開（見圖4)（注意：紙紋方向與展開方向一致；缸內(nèi)石油醚深度約lcm即可，樣斑不能直接接觸石油醚)。
(9)洗脫及比色：待胡蘿卜素與其它色素完全分離后，取出濾紙，將胡蘿卜素層析帶剪下，立即放入盛有5ml石油醚的試管中，用力振搖，使之完全洗入溶液中。以石油醚為空白，立即在波長(zhǎng)450nm處比色。
(10)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取50μg/ml的胡蘿卜素應(yīng)用液2.00ml放入100ml具塞錐形瓶?jī)?nèi)，以下操作步驟與樣品分析(2)～(9)項(xiàng)同，但點(diǎn)樣體積分別為0.04、0.08、、0.12、0.16、0.20相當(dāng)于含胡蘿卜素2、4、6、8、10μg，比色后，繪制曲線。
5、計(jì)算：
樣品胡蘿卜素含量
式中：A-測(cè)定管內(nèi)樣品相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管的微克數(shù)．
V1-點(diǎn)樣毫升數(shù)；
V2-加入瓷蒸發(fā)皿內(nèi)的石油醚毫醫(yī)學(xué)全.在線payment-defi.com升數(shù)
W-樣品克數(shù)
6、注意事項(xiàng)：
(1)搗碎時(shí)加水不能太多，否則不僅提取困難，還不易得均勻樣品。
(2)如無搗碎機(jī)，可用乳缽加河沙研磨河沙處理方法。
(3)濾紙從層析缸取出后，需立即剪下胡蘿卜素層析帶進(jìn)行洗脫，以免氧化破壞使結(jié)果偏低。
