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影響PCR結(jié)果的因素很多，包括(1)標(biāo)本采集和保存不當(dāng)，使靶核酸降解；(2)標(biāo)本處理不當(dāng)，使靶核酸丟失；(3)試劑不合格、過期、保存運(yùn)輸不當(dāng)；(4)核酸擴(kuò)增儀溫度不準(zhǔn)確、擴(kuò)增儀設(shè)置不符合要求；(5)水浴鍋溫度不準(zhǔn)確，核酸提取失�。�(6)移液器不準(zhǔn)確，使擴(kuò)增體系比例不合適；(7)擴(kuò)增管或槍頭存在抑制物導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或不準(zhǔn)確；(8)離心不夠，未徹底清除抑制物；(9)抗病毒治療，標(biāo)本中含有抑制物；本組資料中病毒含量＜103拷貝/ml的3例患者均長期接受抗病毒治療，所以影響檢測結(jié)果；(10)待擴(kuò)增標(biāo)本中的模板DNA濃度過高，超過試劑檢測范圍；(11)待擴(kuò)增標(biāo)本中的模板DNA發(fā)生變異醫(yī)學(xué)全.在線payment-defi.com。
如本組資料中有1例患者調(diào)整后(稀釋10倍)再次檢測病毒含量，結(jié)果同前，經(jīng)分析考慮可能存在病毒變異，更換試劑盒后檢測其病毒含量為2.63×105拷貝/ml。只要采取有效的預(yù)防措施，這些影響結(jié)果準(zhǔn)確性的因素是可以被消除的。具體預(yù)防措施：(1)上崗人員崗前培訓(xùn)并取得資格證書；(2)設(shè)嚴(yán)格的質(zhì)量控制；(3)嚴(yán)格按試劑生產(chǎn)廠家提供的試驗(yàn)程序操作；(4)使用衛(wèi)生部或國家權(quán)威機(jī)構(gòu)指定廠家生產(chǎn)的質(zhì)量可靠的試劑，并在使用過程中注意試劑的有效期，過期的試劑切勿使用；(5)對病原體發(fā)生變異者，當(dāng)擴(kuò)增某一基因片段的引物不能取得結(jié)果時(shí)，改用擴(kuò)增另一基因片段的試劑；(6)檢查儀器的設(shè)置是否符合要求，如溫度、時(shí)間、循環(huán)次數(shù)及器械刻度，對相關(guān)器械定時(shí)檢測并校對；(7)做好標(biāo)本的采集和保存工作，防止靶核酸降解；(8)抗毒藥物對HBV DNA有抑制作用，放置數(shù)天后抑制物可降解或稀釋模板樣本中的PCR抑制物；(9)高溫溫浴后的標(biāo)本應(yīng)冷卻后再離心，使因加熱回流的標(biāo)本液體能離心至離心管底部；(10)每種試劑都有一定測定范圍，待檢模板濃度過高時(shí)，應(yīng)稀釋10～100倍后在檢測；(11)與臨床醫(yī)師及時(shí)溝通，了解患者的前期檢測結(jié)果和用藥史。 HBV感染后有多種免疫學(xué)標(biāo)志可參考，敏感性和特異性已滿足臨床應(yīng)用，目前HBV DNA定量檢測一般用于抗病毒療效評估。如在檢測中出現(xiàn)免疫標(biāo)志與分子生物學(xué)標(biāo)志矛盾時(shí)應(yīng)結(jié)合臨床的全面情況做出合理解釋［2］。
【參考文獻(xiàn)】
1 高俊芬，張翠萍，孫慶國，等.應(yīng)用熒光PCR技術(shù)檢測6500例患者血清HBV DNA的實(shí)驗(yàn)研究.中國試驗(yàn)診斷學(xué)，2002，3：142143.
2 申子瑜，李金明主編. 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù).第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004.98,81.
