 |
 |
3 討論
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，凍融新生小鼠卵巢異體移植能存活，且原始卵泡能生長(zhǎng)發(fā)育至各級(jí)卵泡。 PCNA 又稱(chēng)周期素，與細(xì)胞增殖和DNA合成有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)PCNA陽(yáng)性表達(dá)與Oktay等[4]研究結(jié)果相一致，見(jiàn)于初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡及竇卵泡的顆粒細(xì)胞及初級(jí)卵泡的卵母細(xì)胞，原始卵泡未見(jiàn)PCNA的表達(dá)。兩組移植后14 d的卵巢組織PCNA的陽(yáng)性表達(dá)均較高，說(shuō)明移植的卵巢組織均處于良好的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)，但移植后14 d回收的兩組移植卵巢總卵泡數(shù)明顯少于移植后14 d新鮮小鼠卵巢的總卵泡數(shù)，進(jìn)一步證實(shí)了卵巢組織移植過(guò)程中由于無(wú)直接血管吻合導(dǎo)致的缺血低氧會(huì)損失很大一部分的卵泡[4-5]。本實(shí)驗(yàn)中我們把凍融小鼠卵巢移植至受體小鼠具有豐富血管的腎被膜下，但移植卵巢需要在其周?chē)匦滦纬裳芫W(wǎng)才能恢復(fù)血供，在移植后至血管形成期間卵巢組織由于缺血低氧將導(dǎo)致卵泡的大量丟失，其機(jī)制可能與活性氧ROS的釋放有關(guān)[3]。許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)證實(shí)ROS清除劑（如SOD、抗氧化劑維生素C、維生素E等)可以抑制ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。丹參中所含主要活性成分丹參酚等酚類(lèi)，具有很強(qiáng)的抗氧化活性，可作為天然的抗氧化劑，因此我們將其應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)中。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示丹參組移植后14 d回收卵巢總卵泡數(shù)多于對(duì)照組，各級(jí)卵泡數(shù)也存在明顯差異，且丹參組的卵泡存活率達(dá)64.1%，顯著高于對(duì)照組的卵泡存活率的44.7%，說(shuō)明丹參能減輕凍融卵巢移植后的缺血低氧損傷，提高卵泡存活率。
SOD是一類(lèi)金屬酶，廣泛存在于不需氧的生物組織中， 它能催化超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過(guò)氧化氫和氧，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。SOD活力的高低間接反映了機(jī)體消除氧自由基的能力。丹參是一種強(qiáng)抗氧化劑，它的保護(hù)作用可能是抑制自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損害作用，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性。王宇等[6]在大鼠肝的冷凍灌注保存液中加入丹參注射液，然后進(jìn)行大鼠原位肝移植，發(fā)現(xiàn)丹參組肝組織中的SOD活性明顯升高，肝組織缺血再灌注程度減輕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示丹參組各時(shí)間段移植卵巢組織中的SOD mRNA的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明了丹參注射液可能通過(guò)增高移植卵巢組織中SOD活性，清除氧自由基，對(duì)防治凍融卵巢移植后的缺血低氧損傷起到積極的作用。
NO和NOS與缺血再灌注損傷的關(guān)系密切。NO是一種半衰期很短的自由基氣體，低濃度的NO對(duì)組織具有保護(hù)作用，而高濃度狀態(tài)下對(duì)組織有損害作用。NO是由NOS催化生成的，NOS分為三型：nNOS（神經(jīng)型)、eNOS（內(nèi)皮型)和iNOS（誘導(dǎo)型)，前兩者的激活均依賴(lài)于鈣離子和鈣調(diào)蛋白的作用；iNOS在基態(tài)下不表達(dá)，可由炎癥因子、內(nèi)毒素等誘導(dǎo)激活，作用時(shí)間長(zhǎng)，可催化生成大量NO[7]。Matsumi等發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)不成熟的大鼠卵泡顆粒細(xì)胞中存在iNOS。聶瑩雪等[8]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，iNOS在缺血l2 h時(shí)開(kāi)始增加， 隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)其表達(dá)也逐漸增加。張瑩等[9]將丹參注射液注射至重癥胰腺炎大鼠模型體內(nèi)來(lái)觀察iNOS基因的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參早期治療能抑制iNOS表達(dá)從而起到保護(hù)胰腺的作用。本實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)在卵巢移植后的各時(shí)間段均有iNOS mRNA的表達(dá)，在對(duì)照組中，第1天 iNOS開(kāi)始升高，第2天達(dá)到最高值，第14天有所下降，說(shuō)明iNOS參與了卵巢移植后缺血損傷的過(guò)程。與對(duì)照組相比，丹參組的iNOS表達(dá)降低，兩組差異存在顯著性，提示丹參注射液可能通過(guò)下調(diào)iNOS mRNA的表達(dá)從而抑制NO的過(guò)度產(chǎn)生，對(duì)卵巢移植后的缺血-再灌注損傷起保護(hù)作用。
綜上所述，凍融新生小鼠卵巢同種異體移植原始卵泡能存活并生長(zhǎng)發(fā)育至各級(jí)卵泡，但移植早期的缺血低氧造成大量卵泡的丟失。丹參可能通過(guò)上調(diào)SOD mRNA的表達(dá)，清除氧自由基，下調(diào)iNOS mRNA的表達(dá)，抑制NO過(guò)度產(chǎn)生而對(duì)卵巢移植后的缺血低氧損傷起保護(hù)作用，從而提高卵巢移植后的卵泡存活率。
【參考文獻(xiàn)】
[1] Byrne J, Fears TR, Gail MH, et al. Early menopause in long- term survivors of cancer during adolescence[J]. Am J ObstetGynecol,1992,166(3):788-793.
