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1.2 試劑甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。
1.3 試藥
1.3.1 胡蘆巴 經(jīng)成都中醫(yī)藥大學中藥標本中心盧先明教授鑒定，均為豆科植物胡蘆巴Trigonella foenumgraecum L.的干燥成熟種子。夏季果實成熟時采割植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)。符合《中國藥典》2005年版一部167頁胡蘆巴藥材項下有關規(guī)定。藥材來源與購買地信息具體(見表1)。表1 胡蘆巴HPLC指紋圖譜研究藥材樣品
1.3.2 鹽胡蘆巴 取凈胡蘆巴飲片1 kg，加規(guī)定量的鹽水400 ml拌勻后，置密閉的容器內(nèi)悶潤2 h，置設定的溫度200 ℃下炒炙炒約35 min，每分鐘翻炒30次，取出，放涼。每100 kg藥材用食鹽2 kg.
2 方法學研究
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性實驗
2.1.1 色譜條件色譜柱 DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱;流動相：乙腈水與乙腈的比例,0～25 min為10%～21%，25～60 min為21%～34%，60 min停止。檢測波長：211 nm;流速：1.0 ml/min;柱溫：35 ℃;進樣量：20 μl.
2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取胡蘆巴(鹽胡蘆巴)粉末1 g，分別置于50 ml具塞三角瓶中，分別加入10 ml 70%甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液3 ml，置10 ml容量瓶中，用70%甲醇定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。
2.2 方法學考察
2.2.1 精密度考察 取同一供試品(1號樣品)溶液，連續(xù)進樣5次，以考察儀器的精密度。測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結果表明儀器和整個系統(tǒng)的精密度良好醫(yī).學.全.在.線payment-defi.com。
2.2.2 穩(wěn)定性考察 取同一份供試品(1號樣品)溶液，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h這5個時間點進行檢測，以考察樣品的穩(wěn)定性。測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結果表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.2.3 重復性考察 取同一批號(1號樣品)的供試品5份，按照供試品溶液的制備和檢測方法進行檢測，測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結果表明本方法的重現(xiàn)性良好。
2.3 樣品測定
2.3.1 胡蘆巴生品HPLC指紋圖譜測定[5] 生品胡蘆巴共有10個樣，對應的高效液相圖譜疊加圖見圖1.
2.3.2 胡蘆巴鹽炙品HPLC指紋圖譜測定 鹽胡蘆巴共有10個樣品，對應的高效液相圖譜疊加圖見圖2.
2.3.3 相似度評價 將所得HPLC指紋普圖,選取1號樣品作為代表性樣品，以其色譜作為代表性指紋圖譜，其他樣品與之比較，將其原始測試數(shù)據(jù)輸入指紋圖譜相似度評價軟件中經(jīng)計算產(chǎn)生的相似度。胡蘆巴生品相似度評價結果見表2，胡蘆巴鹽炙品相似度評價結果見表3.表2 10批胡蘆巴生品相似度評價結果表3 10批胡蘆巴鹽炙品相似度評價結果可見大部分樣品圖譜的共性特征基本吻合，相互之間的相似度較高，均在0.90以上，符合《中藥注射劑指紋圖譜技術指南》要求(0.9～1.0)。
