阿法骨化醇原料藥－阿法骨化醇－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定阿法骨化醇原料藥中阿法骨化醇的含量。

本方法適用于阿法骨化醇原料藥。

供試品經(jīng)流動(dòng)相溶解并定量稀釋，加入內(nèi)標(biāo)后再經(jīng)流動(dòng)相稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)265nm處檢測(cè)阿法骨化醇的峰面積，計(jì)算出其含量。

1. 乙酸乙酯

2. 石油醚（60~90℃)

3. 三氯甲烷

4. 地西泮

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按阿法骨化醇峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙酸乙酯 石油醚（60~90℃) 三氯甲烷=42 44 14

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm

2.3 柱溫：室溫

1. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱取地西泮約15mg，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取2mL置100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即為內(nèi)標(biāo)溶液。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿法骨化醇對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1mL中約含10µg的溶液，精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1mL中約含10µg的溶液，精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)265nm處測(cè)定阿法骨化醇（C₂₇H₄₄O₂)的峰面積，計(jì)算出其含量。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，二部，p.295。