九分散－士的寧的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定九分散中士的寧的含量。

本方法適用于中成藥九分散。

供試品于具塞錐形瓶中，加氯仿及濃氨試液搖勻，室溫放置24 小時(shí)，補(bǔ)足氯仿減失的重量，振搖，濾過，量取續(xù)濾液，用硫酸溶液提取生物堿，合并硫酸液，置一分液漏斗，加濃氨試液呈堿性，用氯仿提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，殘?jiān)�加氯仿溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λs=254nm，λ_R=325nm測(cè)量士的寧（C₂₁H₂₂N₂O₂)吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1氯仿

2硫酸

3氨水

4甲苯

5丙酮

6乙醇

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠GF₂₅₄，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1.對(duì)照品溶液的制備

精密稱取土的寧對(duì)照品，加氯仿制成每1mL含0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.供試品溶液的制備

精密稱取供試品約 2g，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿 20mL與濃氨試液1mL，輕輕搖勻，稱重，于室溫放置24 小時(shí)，再稱重，補(bǔ)足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，用硫酸溶液（3→100)分次提取，至生物堿提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，殘?jiān)�中精密加氯�?mL使溶解，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 5μL、對(duì)照品溶液 5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF₂₅₄薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以甲苯－丙酮－乙醇－濃氨試液（16：12：1：4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。

4.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=254nm，λ_R=325nm測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.319。