方法名稱： |
金蕎麥—表兒茶素的含量測定—HPLC |
應(yīng)用范圍： |
本方法適用于金蕎麥中表兒茶素含量的測定 |
方法原理： |
本品細粉加50 %乙醇回流提取，經(jīng)液相色譜分離，在280 nm處測定峰面積，外標法計算含量 |
儀器設(shè)備及實驗條件： |
儀器 Waters 600E高效液相色譜儀、2487雙波長紫外檢測器、Millennium32 色譜管理系統(tǒng) 色譜條件 色譜柱：Symmetry C18（150 mm×3.9 mm，5 μm)；流動相：水（用磷酸調(diào)pH值至3.00±0.02)—乙腈（92:8)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL |
試樣制備： |
對照品溶液制備 精密稱�。�-)-表兒茶素對照品適量，加乙腈-水（1:9)制成含（-)-表兒茶素30 μg/mL的溶液，即得。 供試品溶液制備 取本品細粉約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 %乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，放置過夜，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用50 %乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，減壓濃縮至近干，殘渣加乙腈-水（1:9)分次洗滌，洗液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（1:9)至刻度，搖勻，離心（3000 r/min)5 min，精密量取上清液5 mL，加入聚酰銨柱（30～60目，3 g，內(nèi)徑1.0 cm，濕法裝柱)，以水30 mL洗脫，棄去水液，再用甲醇100 mL洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至近干，殘渣加乙腈-水（1:9)使溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（1:9)至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。 |
操作步驟： |
分別精密吸�。�-)-表兒茶素對照液以及金蕎麥供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以外標法計算（-)-表兒茶素含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻： |
何美珊，錢炳輝，王兆龍等. HPLC法測定金蕎麥中（-)-表兒茶素含量. 中草藥 .2005，36（3)︰441～442 |
