| 公開(公告)號(hào) | CN1944456A |
| 公開(公告)日 | 2007.04.11 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200610096899.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2006.10.24 |
| 專利名稱 | 一種苦蕎麥抗腫瘤蛋白的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C07K1/30(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K1/30(2006.01)I;C07K2/00(2006.01)I;A61K38/02(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A23J1/12(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 江南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 郭曉娜;姚惠源;張 暉;王 立 |
| 地址 | 214036江蘇省無(wú)錫市惠河路170號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 時(shí)旭丹 |
| 國(guó)省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種苦蕎麥抗腫瘤蛋白的制備方法，其特征在于：以苦蕎麥粉為原料，加緩沖液進(jìn)行攪拌提取，離心分離，收集上清液，加硫酸銨分級(jí)沉淀，離心分離，收集沉淀，復(fù)溶，透析，冷凍干燥得到苦蕎麥水溶性蛋白質(zhì)TBWSP；TBWSP溶解于緩沖液中上DEAE-Sepharose FF離子交換層析柱，分離得到抗腫瘤活性組分TBWSP3；TBWSP3溶解于緩沖液中上Sephadex G-100凝膠過(guò)濾層析柱，得到抗腫瘤活性的有效組分TBWSP31，工藝為： (1)苦蕎麥水溶性蛋白質(zhì)TBWSP的制備：苦蕎麥粉加入到pH7.2，10mmol/L磷酸鹽緩沖液中，苦蕎麥粉與緩沖液的質(zhì)量/體積比為1∶10，室溫下攪拌提取2h，然后4℃、10000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集上清液，上清液中加入固體硫酸銨，至飽和度為70％～90％，再攪拌20分鐘，然后4℃、10000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，棄去上清液收集沉淀，沉淀加少量水復(fù)溶，然后將其裝入透析袋中，置于4℃去離子水中透析48h，濃縮后冷凍干燥，制得TBWSP； (2)DEAE-Sepharose FF離子交換層析：苦蕎麥水溶性蛋白冷凍干燥樣品TBWSP溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸鹽緩沖液中，TBWSP的濃度為5～10mg/mL，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液加入到DEAE-Sepharose FF離子交換柱中，依次用pH7.2、10mmol/L磷酸鹽緩沖液、含0.2mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液和含0.5mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，分別收集峰組分，用280nm紫外檢測(cè)法逐管檢測(cè)，命名為：TBWSP1、TBWSP2和TBWSP3，蒸餾水透析脫鹽，冷凍干燥，分離得到抗腫瘤活性組分TBWSP3； (3)ephadex G-100凝膠過(guò)濾層析：TBWSP3溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸鹽緩沖液中，TBWSP3的濃度為10～15mg/mL，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液加入到ephadex G-100凝膠過(guò)濾柱中，然后用pH7.2、10mmol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫，收集峰組分，用280nm紫外檢測(cè)法逐管檢測(cè)，命名為：TBWSP31、TBWSP32和TBWSP33，蒸餾水透析脫鹽，冷凍干燥，純化得到抗腫瘤活性組分TBWSP31。 |
| 摘要 | 一種苦蕎麥抗腫瘤蛋白的制備方法，屬于苦蕎麥精深加工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以苦蕎麥粉為原料，采用硫酸銨分級(jí)沉淀、離子交換色譜和凝膠過(guò)濾色譜對(duì)苦蕎麥水溶性蛋白質(zhì)(TBWSP)中抗腫瘤活性組分進(jìn)行篩選、分離及純化，得到了具有抗腫瘤活性的有效組分TBWSP31。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)科學(xué)合理，所得組分TBWSP31對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株Bcap37的生長(zhǎng)有顯著的增殖抑制活性，IC50值為19.75μg/mL，為苦蕎麥的綜合利用和深度開發(fā)提供理論依據(jù)和應(yīng)用價(jià)值。 |
| 國(guó)際公布 |
