公開(公告)號
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CN1301264C
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公開(公告)日
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2007.02.21
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申請(專利)號
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CN200510000032.2
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申請日期
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2005.01.05
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專利名稱
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海洋生物抗氧化活性肽及其制備方法
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主分類號
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C07K7/06(2006.01)I
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分類號
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C07K7/06(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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王躍軍;孫 謐;鄒 建;王海英
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地址
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266071山東省青島市南京路106號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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北京金信立方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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史和初
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國省代碼
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山東;37
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主權(quán)項(xiàng)
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一種海洋生物抗氧化活性肽的制備方法,包括 (1)抗氧化活性蛋白的制備: ①將貝類內(nèi)臟團(tuán)絞碎,然后按濕重1∶1(w/w)加入含0.2%Triton-100;0.1mmol/L EDTA的1.0%的NaCl溶液置組織勻漿器中制成勻漿; ②調(diào)pH為5.6,70℃水浴加熱5min,迅速冷卻,冷卻液經(jīng)離心10min,收集上清液,調(diào)pH至6.7后收取60~90%飽和度的(NH4)2SO4沉淀,沉淀用5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液溶解、透析; ③將離心透析液取上清液,加入1.5倍預(yù)冷丙酮,將丙酮沉淀物再溶解于5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液中并充分透析得粗蛋白液; ④粗蛋白液經(jīng)聚乙二醇20000濃縮、離心除不溶物,取上清液上DEAE-Sephadex A-50 20×400mm柱,先用5mmol/L pH 7.5的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液充分平衡,再用含0~0.2M氯化鈉的上述緩沖液梯度洗脫,流速20ml/h,收集在280nm有吸收的餾份,合并具SOD活性的餾份,濃縮并用雙蒸水充分透析、凍干保存; (2)抗氧化活性多肽制備 ①向抗氧化蛋白加入海洋低溫堿性蛋白酶,蛋白質(zhì)與酶重量比為33∶1.6,調(diào)pH為9.0,于30℃恒溫水浴中酶解24小時(shí),酶解結(jié)束后,將酶解液置于沸水浴中加熱使酶失活,冷卻,離心除去變性的大分子蛋白,取上清液冷凍干燥; ②酶解后粗品用去離子水溶解,經(jīng)Sephadex G-25凝膠柱層析進(jìn)一步去除大分子蛋白:用pH7.2三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液平衡后裝18×1000mm柱,上樣后用平衡緩沖液洗脫,流速為3ml/min,280nm處檢測; (3)提純 ①CM Sepharose陽離子交換柱層析: 陽離子交換劑CM Sepharose Fast Flow,經(jīng)預(yù)處理后用pH3.0的2mM磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液平衡后裝30×160mm柱,上樣后用緩沖液洗脫到出現(xiàn)基線,再用含0~0.5M氯化鈉的上述緩沖液梯度洗脫,收集活性峰; ②反相高效液相色譜(RP-HPLC) Waters 2690高效液相色譜系統(tǒng),Symmetry C18分析型色譜5um,3.9×150mm柱,上樣溶液為過膜去離子水,洗脫液為30%乙腈-水溶液,0%~100%洗脫液洗脫15ml,樣品收集后真空冷凍干燥,得純海洋生物抗氧化活性肽。
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摘要
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本發(fā)明涉及新型海洋生物抗氧化活性肽及其制備方法,該海洋生物抗氧化活性肽,其特征為一小分子量多肽類物質(zhì),分子量為794Da1;由7種氨基酸組成,分別為天冬氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸和賴氨酸,其物質(zhì)的量之比為1∶1∶1∶1∶2∶1∶1。含有8個(gè)氨基酸殘基。其中酸性氨基酸的相對含量為9.22%,堿性氨基酸的相對含量為12.62%,極性氨基酸的相對含量為44.8%。本發(fā)明提供的海洋生物抗氧化活性肽具有如下明顯的優(yōu)點(diǎn):抗氧化活性強(qiáng)、水溶性好及安全、無毒、無副作用等,適宜應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
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國際公布
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