| 公開(公告)號(hào) | CN1884527A |
| 公開(公告)日 | 2006.12.27 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200610012821.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2006.06.09 |
| 專利名稱 | 利用內(nèi)源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/12(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 鄭金平;唐海英 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鄭金平;唐海英;陳顯久;解 軍 |
| 地址 | 030001山西省太原市新建南路56號(hào)山西醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生毒理學(xué)教研室 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 山西太原科衛(wèi)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 朱 源 |
| 國(guó)省代碼 | 山西;14 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種利用內(nèi)源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法，步驟包括，從人體中提取總RNA，加入上、下游引物，RT-PCR反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增得到Arresten基因的DNA，再取質(zhì)粒載體雙酶切后與RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Arresten DNA雙酶切后連接，得到連接反應(yīng)產(chǎn)物，最后將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入到宿主大腸桿菌中表達(dá)，得到Arresten蛋白，其特征在于：連接及表達(dá)載體所用質(zhì)粒為pBV220，載體pBV220與目的ArrestenDNA的摩爾數(shù)比：1∶1～1∶3，在15～18℃連接，時(shí)間8～10小時(shí)，得到連接反應(yīng)產(chǎn)物pBV220-Arr。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因重組、表達(dá)技術(shù)，具體為一種利用內(nèi)源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法。解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的利用人體中的Arresten基因制備具有抑制腫瘤血管生成的蛋白質(zhì)過程中存在的效率低下的問題。步驟包括，從人體中提取總RNA，加入上、下游引物， RT-PCR反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增得到Arresten基因的DNA，再取質(zhì)粒載體pBV220雙酶切后與RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Arresten DNA雙酶切后連接，得到連接反應(yīng)產(chǎn)物pBV220-Arr，最后將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入到宿主大腸桿菌中表達(dá)，得到Arresten蛋白。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明使用一種同時(shí)作為連接載體和表達(dá)載體的質(zhì)粒pBV220，既簡(jiǎn)單又經(jīng)濟(jì)，節(jié)省了成本，而且表達(dá)效果非常好，提高了合成的效率。為所需目的蛋白的合成提供了一種新途徑。 |
| 國(guó)際公布 |
