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一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體及其基因工程產(chǎn)品

公開(公告)號(hào) CN1869239A  
公開(公告)日 2006.11.29  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200610040766.8  
申請(qǐng)日期 2006.06.01  
專利名稱 一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體及其基因工程產(chǎn)品  
主分類號(hào) C12N15/81(2006.01)I  
分類號(hào) C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 陳溥言;葛菲菲;邱亞峰;曹瑞兵;周 斌  
地址 210095江蘇省南京市衛(wèi)崗1號(hào)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)科技處錢寶英  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司  
代理人 樓高潮  
國省代碼 江蘇;32  
主權(quán)項(xiàng) 一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體,是通過以下方法獲得的: 1)設(shè)計(jì)引物: 上游引物p1:5’GAATTCATCCTCCTGCTGTTGGTC3’; 下游引物p2:5’GGATCCGAAGGGGTTCACTGTCAC3’; 以乙腦E蛋白基因?yàn)槟0,通過PCR方法擴(kuò)增獲得乙腦E蛋白上主要抗原片段基因,E蛋白上主要抗原片段基因位于乙腦SA14-14-2毒株基因組的946nt-2058nt; 2)設(shè)計(jì)引物: 上游引物p1:5’GGATCCATGGCTCGTGCGGTCGGGATCGACC3’; 下游引物p2:5’TCTAGAAACTTGGCCTCCCGGCCGTCGTCG3’; 以人結(jié)核桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株的基因組為模板,PCR方法擴(kuò)增出M.T hsp70基因,M.T hsp70基因登錄號(hào)為X58406; 3)首先將E蛋白上主要抗原片段基因用酶切位點(diǎn)EcoR I和BamH I連接到pBluescript SK+質(zhì)粒中,然后將M. Thsp70基因用酶切位點(diǎn)BamH I和Xba I連接到pBluescript SK+質(zhì)粒中E蛋白主要抗原片段基因的下游,因此獲得將E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因融合在pBluescript SK+上的載體SK-E-hsp70,再通過EcoR I和Xba I這兩個(gè)酶切位點(diǎn)將E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因形成的融合基因切下來,隨后同樣通過EcoRI和Xba I這兩個(gè)酶切位點(diǎn)連接到畢赤酵母表達(dá)載體pPICZ α-A上,從而構(gòu)建成功融合酵母表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70。  
摘要 本發(fā)明涉及一種融合蛋白的酵母表達(dá)載體及其基因工程產(chǎn)品,屬于生物技術(shù)制藥工業(yè)中的基因工程生產(chǎn)疫苗藥物的技術(shù)領(lǐng)域。分別以乙腦E蛋白基因和人結(jié)核桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株的基因組為模板擴(kuò)增出E蛋白主要抗原片段基因和M.Thsp70基因,先將這兩個(gè)基因以一個(gè)酶切位點(diǎn)BamHI連接的方式克隆入pBluescript SK+質(zhì)粒中,最后將該融合基因克隆入pPICZ α-A中,構(gòu)建酵母表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70,按照說明書,該融合表達(dá)載體pPICZ α-E-hsp70線性化后,電轉(zhuǎn)化酵母菌,通過甲醇誘導(dǎo)表達(dá),從而獲得融合蛋白E-hsp70,來開發(fā)研制相關(guān)的基因工程產(chǎn)品。  
國際公布  
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