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實時定量PCR技術(shù)檢測人21號染色體數(shù)目的方法

公開(公告)號 CN100338227C  
公開(公告)日 2007.09.19  
申請(專利)號 CN200510049601.2  
申請日期 2005.04.20  
專利名稱 實時定量PCR技術(shù)檢測人21號染色體數(shù)目的方法  
主分類號 C12Q1/68(2006.01)I  
分類號 C12Q1/68(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院  
發(fā)明(設(shè)計)人 呂時銘;朱宇寧;裘 儉;朱 波;尤建飛  
地址 310006浙江省杭州市學(xué)士路2號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 杭州求是專利事務(wù)所有限公司  
代理人 張法高;趙杭麗  
國省代碼 浙江;33  
主權(quán)項 用于實時定量PCR技術(shù)檢測人21號染色體數(shù)目的試劑盒,含有多重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)液、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品材料,其特征是:在多重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)液中含有兩對引物和相應(yīng)的Taqman熒光探針、熱啟動DNA聚合酶及反應(yīng)緩沖液、dNTP、MgCl2、熒光染料ROX,其中一對引物及探針擴增及檢測21號染色體上DSCR4基因的部分非多態(tài)性片段,為目標分子標記,另一對引物及探針擴增及檢測1號染色體上RABIF基因的部分片段,為內(nèi)參分子標記,其中:(1)目標分子標記序列為:GTTGATGGGCTTGCGCTTATCTGCTTGTCCCTTCTCCCATCTGATTTCTTGTGGAGCCCATGG上游引物序列:5’-GTTGATGGGCTTGCGCTTAT-3’下游引物序列:5’-CCATGGGCTCCACAAGAAAT-3’Taqman探針序列:5’-Fam-TGCTTGTCCCTTCTCCCATCT-Tamra-3’(2)內(nèi)參分子標記序列為:TCAACATGGGCCCCACATGGTCCTAGTTTCCCCGGCTCATTATGCTTCAGGCACACTGGCTTTCTTGC上游引物序列:5’-TCAACATGGGCCCCACAT-3’下游引物序列:5’-GCCAGTGTGCCTGAAGCA-3’Taqman探針序列:5’-Vic-TCCTAGTTTCCCCGGCTCATT-Tamra-3’。  
摘要 本發(fā)明提供檢測人21號染色體數(shù)目的方法,是應(yīng)用基因組特異性單拷貝序列作為染色體的分子標記,在21號染色體的唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)域選擇DSCR4基因的部分非多態(tài)性片段為目標分子標記,在1號染色體上不易發(fā)生缺失或三體的區(qū)域選擇RABIF基因的部分片段為內(nèi)參分子標記。設(shè)計兩對引物及相應(yīng)的Taqman探針,采用多重實時定量PCR技術(shù)同管擴增這兩個序列,通過反映相對量的delta ct值來確定21號染色體的數(shù)目并由此診斷21三體綜合征。本發(fā)明將染色體的數(shù)目分析轉(zhuǎn)化為分子信號檢測,充分利用分子定量的優(yōu)勢,不僅方法簡便、高度敏感、穩(wěn)定和檢測率高,而且還具有高通量和自動化的特點,在臨床有極好的應(yīng)用前景。  
國際公布  
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