公開(公告)號 | CN1306965C |
公開(公告)日 | 2007.03.28 |
申請(專利)號 | CN200410023347.4 |
申請日期 | 2004.06.25 |
專利名稱 | 一種基因載體的制備方法及應(yīng)用 |
主分類號 | A61K48/00(2006.01)I |
分類號 | A61K48/00(2006.01)I |
分案原申請?zhí)? | |
優(yōu)先權(quán) | |
申請(專利權(quán))人 | 中南大學(xué) |
發(fā)明(設(shè)計)人 | 周科朝;朱曬紅;黃蘇萍;李志友 |
地址 | 410083湖南省長沙市左家垅 |
頒證日 | |
國際申請 | |
進(jìn)入國家日期 | |
專利代理機(jī)構(gòu) | 中南大學(xué)專利中心 |
代理人 | 胡燕瑜 |
國省代碼 | 湖南;43 |
主權(quán)項 | 一種基因載體的制備方法,其特征在于:(1)羥基磷灰石納米顆粒制備:將分析純Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4分別溶于去離子水中,配成1mol/L的溶液,將Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以體積比5∶3的比例在1500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速下混合,并用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值在11~12范圍,攪拌10小時后,老化24小時;再將得到的沉淀物放入高壓釜中,在200℃、200mv、200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下處理4小時,再經(jīng)清洗、過濾、干燥得到羥基磷灰石納米顆粒;(2)羥基磷灰石納米顆粒生物相容性實驗:將SGC-7901細(xì)胞接種于96孔組織培養(yǎng)板;加入不同濃度的納米顆;鞈乙,繼續(xù)培養(yǎng)48h后進(jìn)行MTT測定,比色法確定有活力的細(xì)胞數(shù),方差分析方法采用SPSS9.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行;(3)羥基磷灰石納米顆粒與DNA結(jié)合實驗:取瓊脂糖粉制凝膠,將羥基磷灰石納米顆;鞈乙合♂,加PEGFP-N1混均10min,靜置30min,離心;以PEGFP-N11μg為對照,取上清液瓊脂糖凝膠電泳檢測;取羥基磷灰石納米顆;鞈乙,并將其調(diào)至不同的pH值,分別放入eppendorf管與PEGFP-N1混合,混均,室溫靜置30min,離心;取上清液瓊脂糖凝膠電泳檢測;(4)納米顆粒一DNA復(fù)合體體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞實驗:將SGC一7901細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿加入配有小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,在培養(yǎng)皿加入納米顆粒DNA復(fù)合體;以單純PEGFP-N1表達(dá)質(zhì)粒DNA以及與脂質(zhì)體結(jié)合的PEGFP-N1表達(dá)質(zhì)粒DNA作為對照;混合培養(yǎng)分別于24,48,72h后熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。 |
摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域用的材料,尤其是一種基因載體材料的制備方法,其特征在于:將Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以體積比5∶3的比例在1500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速下混合,再將得到的沉淀物放入高壓釜中,在200℃、200mv、200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下處理4小時,得到羥基磷灰石納米顆粒;它的結(jié)構(gòu)與骨和牙齒相似,是具有良好生物相容性的生物陶瓷材料,可根據(jù)應(yīng)用的要求制備成所需要的幾何形態(tài),具有大的表面能,增強其攜帶DNA的能力,解決了基因載體轉(zhuǎn)導(dǎo)率低、藥物易從脂質(zhì)體中滲漏和難制備等問題,保證了在使用過程中的分散穩(wěn)定性,滿足了基因治病的有效性和安全性。 |
國際公布 |