| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN100334219C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.08.29 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510018686.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.05.12 |
| 專利名稱 | 共聚物促進(jìn)超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/87(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/87(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 陳云超;張青萍 |
| 地址 | 430030湖北省武漢市漢口解放大道1095號(hào)(同濟(jì)醫(yī)院科研處) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 武漢開(kāi)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 胡鎮(zhèn)西 |
| 國(guó)省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種共聚物促進(jìn)超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法，包括以下步驟：1)將共聚物溶解在生理鹽水中，配制成共聚物溶液，過(guò)濾除菌后備用，所選擇的共聚物為F127、L61、或P85中的一種；2)將細(xì)胞懸液接種在培養(yǎng)皿中隔夜培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液吸干，用磷酸緩沖液清洗，再吸干殘液；3)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染液：在試管中加入DNA、步驟1)所配制的共聚物溶液、和與步驟2)中細(xì)胞懸液對(duì)應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液，使試管中DNA的最終濃度為8μg/ml，共聚物的最終濃度按mg/ml計(jì)量為0.001％～0.1％；4)將步驟3)所準(zhǔn)備的轉(zhuǎn)染液加入到步驟2)的培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)染液的加入量與細(xì)胞懸液的接種量相同，置溫箱中培養(yǎng)10～30分鐘；5)將治療用超聲儀探頭面朝上安置在水槽中，水平面覆蓋探頭，然后將步驟4)所得待照射培養(yǎng)皿的底部浸在水中緊鄰探頭，并使待照射孔在探頭的正上面，在照射過(guò)程中勻速移動(dòng)培養(yǎng)皿使培養(yǎng)孔內(nèi)的細(xì)胞受到均勻照射；6)將經(jīng)過(guò)步驟5)照射的培養(yǎng)皿置溫箱中隔夜培養(yǎng)，次日先用熒光顯微鏡觀察基因轉(zhuǎn)染情況，然后用胰蛋白酶懸浮細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染率后，用胎盤(pán)藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞成活率。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種共聚物促進(jìn)超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法，主要解決現(xiàn)有非病毒載體基因轉(zhuǎn)染率較低的問(wèn)題。該方法是將共聚物和超聲結(jié)合起來(lái)，應(yīng)用不同的濃度，來(lái)檢測(cè)各類共聚物對(duì)不同細(xì)胞系在超聲介導(dǎo)中的基因轉(zhuǎn)染作用，并通過(guò)流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡和細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染率和成活率的檢測(cè)，從而獲得不同共聚物在不同濃度時(shí)對(duì)超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的作用。從附圖中人們可清晰地看到，在一定濃度范圍內(nèi)，這類共聚物和超聲一起可作為一種有效的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體提高基因轉(zhuǎn)染，這對(duì)疾病的基因治療研究工作具有重要的指導(dǎo)意義。 |
| 國(guó)際公布 |
