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修飾的核酸序列以及增加細(xì)胞系統(tǒng)中mRNA水平和蛋白質(zhì)表達的方法

公開(公告)號 CN1325646C  
公開(公告)日 2007.07.11  
申請(專利)號 CN98810400.8  
申請日期 1998.10.20  
專利名稱 修飾的核酸序列以及增加細(xì)胞系統(tǒng)中mRNA水平和蛋白質(zhì)表達的方法  
主分類號 C12N15/30(2006.01)I  
分類號 C12N15/30(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C07K14/445(2006.01)I;A01K67/027(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1997.10.20 US 60/062,592;1998.5.15 US 60/085,649  
申請(專利權(quán))人 GTC生物治療學(xué)公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 L·H·陳;H·米德  
地址 美國馬薩諸塞州  
頒證日  
國際申請 1998-10-20 PCT/US1998/022225  
進入國家日期 2000.04.20  
專利代理機構(gòu) 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標(biāo)事務(wù)所  
代理人 周中琦  
國省代碼 美國;US  
主權(quán)項 在非人轉(zhuǎn)基因哺乳動物的乳汁中產(chǎn)生寄生物蛋白或其片段的方法,其包含:提供非人轉(zhuǎn)基因哺乳動物,其基因組包含與定向乳腺表達的啟動子有效連接的編碼所述寄生物蛋白或其片段的修飾的核酸序列,其中的修飾的核酸序列經(jīng)下述方式被修飾:a)將所述的寄生物蛋白或其片段的編碼序列在寄生物中天然存在的至少一部分AUUUA mRNA不穩(wěn)定性基序置換為用于表達的哺乳動物細(xì)胞優(yōu)選的密碼子,以去除所述的AUUUA mRNA不穩(wěn)定性基序或防止所述的AUUUA mRNA不穩(wěn)定性基序使編碼所述寄生物蛋白或其片段的mRNA不穩(wěn)定,同時與被置換的所述的AUUUA mRNA不穩(wěn)定性基序部分編碼相同的基酸;b)將所述的被修飾核酸序列在寄生物中天然存在的一個或多個含AT的密碼子置換為用于表達的哺乳動物細(xì)胞優(yōu)選的并且與所述被置換的密碼子編碼相同的氨基酸的密碼子;c)使所述非人轉(zhuǎn)基因哺乳動物在其乳汁中表達所述的寄生物蛋白或其片段,從而產(chǎn)生所述的寄生物蛋白或其片段,并且其中編碼所述的寄生物蛋白或其片段的天然存在的核酸序列包含至少一個AUUUA不穩(wěn)定性基序。  
摘要 本發(fā)明提供了修飾的重組核酸序列(優(yōu)選的是DNA)以及增加蛋白質(zhì)的mRNA水平和蛋白質(zhì)表達的方法,這里的蛋白質(zhì)是已知或很可能在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)或轉(zhuǎn)基因動物中難以表達的蛋白質(zhì)。使用本發(fā)明重組技術(shù)表達的優(yōu)選的“困難”蛋白質(zhì)候選物是從優(yōu)選是諸如寄生生物、細(xì)菌和病毒等低等生物的異源細(xì)胞衍生的蛋白質(zhì)。它們的DNA編碼序列相對使用的重組表達系統(tǒng)而言含有高的總AT含量或富AT區(qū)和/或mRNA不穩(wěn)定基序和/或稀有密碼子。  
國際公布 1999-04-29 WO1999/020766 英  
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