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一種高親和力免疫球蛋白結(jié)合分子及其制備方法

公開(公告)號(hào) CN1319988C  
公開(公告)日 2007.06.06  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410067157.2  
申請(qǐng)日期 2004.10.14  
專利名稱 一種高親和力免疫球蛋白結(jié)合分子及其制備方法  
主分類號(hào) C07K14/00(2006.01)I  
分類號(hào) C07K14/00(2006.01)I;C07K14/31(2006.01)I;C07K14/315(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;G01N33/535(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 上海潤(rùn)龍生物科技有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 潘 衛(wèi);徐 容;王金華;謝天培;李云華;王德貴;沈毅珺;揚(yáng) 華;王錦紅;許浩坤  
地址 200065上海市普陀區(qū)延長(zhǎng)西路25號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海光華專利事務(wù)所  
代理人 余明偉;沈錫英  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種重組Ig結(jié)合分子文庫(kù),其特征在于:所述文庫(kù)是由以不同的Ig結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域,大消化鏈球菌L蛋白的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域,G群或C群鏈球菌G蛋白的G1、G2結(jié)構(gòu)域的單個(gè)抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)榻Y(jié)構(gòu)單元,以結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)DNA重排形成的Ig結(jié)合分子組成,其中上述結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列分別為:SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:12,單個(gè)結(jié)構(gòu)域之間以核苷酸GAGCTC連接,結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)DNA重排形成的Ig結(jié)合分子通過如下方法獲得:(1)將Ig結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域,大消化鏈球菌L蛋白的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域,G群或C群鏈球菌G蛋白的G1、G2結(jié)構(gòu)域的單個(gè)抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別經(jīng)PCR擴(kuò)增引入Sac I酶切位點(diǎn)作為連接點(diǎn);(2)將PCR回收產(chǎn)物分別經(jīng)Sac I酶切消化;(3)將步驟(2)獲得的Sac I酶切消化產(chǎn)物混合,用T4連接酶將各單結(jié)構(gòu)域進(jìn)行隨機(jī)連接重組。  
摘要 本發(fā)明涉及一種重組免疫球蛋白結(jié)合分子文庫(kù)、其制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明是以來(lái)自不同種屬免疫球蛋白結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白protein A的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域、大消化鏈球菌proteinL的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域、C和G群鏈球菌蛋白G protein G的G1、G2為結(jié)構(gòu)單元,將上述結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)連接,構(gòu)建重組Ig結(jié)合分子文庫(kù),將該文庫(kù)展示在噬菌體表面;以免疫球蛋白對(duì)噬菌體展示重組Ig結(jié)合分子文庫(kù)進(jìn)行3-4輪親和篩選,獲得系列高親和力免疫球蛋白結(jié)合分子噬菌體文庫(kù)。上述文庫(kù)可用于篩選高親和力Ig結(jié)合分子。  
國(guó)際公布  
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