公開(公告)號
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CN1284797C
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公開(公告)日
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2006.11.15
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申請(專利)號
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CN200510012414.7
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申請日期
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2005.03.22
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專利名稱
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人重組組織因子的構(gòu)建表達、純化方法及其應(yīng)用
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主分類號
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C07K14/435(2006.01)I
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分類號
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C07K14/435(2006.01)I;C07K14/475(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I;C12Q1/56(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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太原博奧特生物技術(shù)有限公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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焦進安;趙 邑;郝建平;李晉川;謝 紅;趙峰梅
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地址
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030006山西省太原市師范街110號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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山西五維專利事務(wù)所有限公司
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代理人
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李 毅
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國省代碼
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山西;14
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主權(quán)項
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一種人重組組織因子,其核苷酸序列如圖1所示,含有天然人組織因子跨膜部分和膜外部分的243個氨基酸殘基,為缺失胞內(nèi)區(qū)的截斷型人重組組織因子recombinant human tissue factor,簡稱rhTF243,具有天然人組織因子的全部凝血活性。
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摘要
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本發(fā)明涉及人重組組織因子的構(gòu)建、表達和純化方法及應(yīng)用。從人胎盤中獲取得到的TF基因片段與phoA質(zhì)粒重組,構(gòu)建質(zhì)粒載體pTF243,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌MM294中,篩選得到工程菌株,接入培養(yǎng)基直接發(fā)酵表達,得到的菌液先使用Q-Sepharose Fast Flow基質(zhì)離子交換層析,再通過TF單抗免疫親和層析柱吸附洗脫,得到rhTF243蛋白。本發(fā)明中TF隨培養(yǎng)基中磷的消耗而直接表達,不需增加誘導物和對蛋白質(zhì)進行變性與復性,簡化了發(fā)酵工藝,提高了表達率,采用TF單抗純化rhTF243蛋白,不會受到不可逆損傷,獲得rhTF243純度95%以上,收率大于60%,制備的PT試劑穩(wěn)定性和敏感性均得到了提高。
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國際公布
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