| 公開(公告)號 | CN1269966C |
| 公開(公告)日 | 2006.08.16 |
| 申請(專利)號 | CN02807389.4 |
| 申請日期 | 2002.03.06 |
| 專利名稱 | 用基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增來擴(kuò)增和檢測HBV DNA的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/70(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2001.3.7 EP 01200855.3 |
| 申請(專利權(quán))人 | 拜奧默里克斯有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | B·A·L·M·戴曼;I·M·弗蘭岑;A·M·W·斯特里杰普 |
| 地址 | 荷蘭伯克斯特爾 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | 2002-03-06 PCT/EP2002/002600 |
| 進(jìn)入國家日期 | 2003.09.26 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 唐偉杰 |
| 國省代碼 | 荷蘭;NL |
| 主權(quán)項(xiàng) | 基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增目標(biāo)HBV核酸序列的方法，該方法從存在于樣品中的HBVDNA開始，其包括下列步驟：-在擴(kuò)增緩沖液中將疑似含有HBV的樣品與下述成分一起溫育：一或多種能夠在所選限制位點(diǎn)切割該HBVDNA的限制性內(nèi)切酶，該限制性內(nèi)切酶在該HBVDNA鏈上形成指定的3′末端；啟動子引物或正向引物，其中具有包含DNA依賴性的RNA聚合酶所識別的啟動子序列的5′區(qū)域以及與該DNA鏈的指定3′末端互補(bǔ)的3′區(qū)域；第二或反向引物，其具有與啟動子引物相反的極性且含有該目標(biāo)序列的5′末端；以及在HBVssDNA作為目標(biāo)序列的情況下，還含有限制性引物；-將如此形成的反應(yīng)混合物在適當(dāng)?shù)臈l件下保持足夠的時(shí)間，以進(jìn)行限制性內(nèi)切酶的消化；-將如此獲得的樣品以足以失活限制性內(nèi)切酶和/或至少部分地導(dǎo)致雙鏈發(fā)生單鏈化的溫度和時(shí)間進(jìn)行加熱處理；-向樣品中加入下列試劑，具有RNA依賴性的DNA聚合酶活性的酶具有DNA依賴性的DNA聚合酶活性的酶具有RNA酶H活性的酶具有RNA聚合酶活性的酶；和-將如此形成的反應(yīng)混合物在適當(dāng)?shù)臈l件下保持足夠的時(shí)間，以進(jìn)行擴(kuò)增。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增目標(biāo)HBV核酸序列的方法，該方法從可選存在于樣品中的HBV DNA開始，其包括下列步驟：-在擴(kuò)增緩沖液中溫育懷疑含有HBV的樣品，該溫育體系中含有一種或多種能夠在選擇出的限制位點(diǎn)切割HBV DNA的限制性內(nèi)切酶，該限制性內(nèi)切酶形成指定的此HBV DNA鏈的3′末端；該溫育體系中含有啟動子引物，該啟動子引物具有包含被依賴DNA的RNA聚合酶所識別的啟動子序列的5′區(qū)域和與指定的DNA鏈的3′末端互補(bǔ)的3′區(qū)域；該溫育體系中含有第二或反向引物，其具有與啟動子引物相反的極性且含有該目標(biāo)序列的5′末端；且在HBV ssDNA作為目標(biāo)序列的情況下，該溫育體系中含有限制性引物；-將如此形成的反應(yīng)混合物在適當(dāng)?shù)臈l件下保持足夠的時(shí)間，以進(jìn)行限制性內(nèi)切酶的消化；-將如此獲得的樣品以一定的溫度和時(shí)間進(jìn)行加熱處理，該溫度和時(shí)間足以失活限制性內(nèi)切酶和/或至少部分地導(dǎo)致雙鏈的單鏈化；-向樣品中加入下列試劑，具有依賴RNA的DNA聚合酶活性的酶、具有依賴DNA的DNA聚合酶活性的酶、具有RNA酶H活性的酶、具有RNA聚合酶活性的酶；和-將如此形成的反應(yīng)混合物在適當(dāng)?shù)臈l件下保持足夠的時(shí)間，以進(jìn)行擴(kuò)增。 |
| 國際公布 | 2002-09-19 WO2002/072881 英 |
