公開(公告)號(hào)
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CN1267551C
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公開(公告)日
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2006.08.02
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN99817049.6
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申請(qǐng)日期
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1999.10.19
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專利名稱
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重組成熟溶葡萄球菌素的表達(dá)
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主分類號(hào)
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C12N15/00(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N9/48(2006.01)I;C12N9/52(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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印度生物技術(shù)國(guó)際有限公司;科學(xué)及工業(yè)研究委員會(huì)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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G·S·哈特里;R·沙馬
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地址
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印度海得拉巴
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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1999-10-19 PCT/IB1999/001704
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進(jìn)入國(guó)家日期
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2002.06.19
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國(guó)專利代理(香港)有限公司
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代理人
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張廣育;孟凡宏
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國(guó)省代碼
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印度;IN
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主權(quán)項(xiàng)
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一種生產(chǎn)不含前溶葡萄球菌素原和溶葡萄球菌素原的成熟溶葡萄球菌素內(nèi)肽酶的方法,其特征在于:(a)提供一種遺傳構(gòu)建體,該構(gòu)建體含有一段在編碼溶葡萄球菌素原的元件不存在的條件下編碼成熱溶葡萄球菌素內(nèi)肽酶的核苷酸序列,該核苷酸序列位于表達(dá)載體中翻澤起始密碼子“ATG”的下游,和一個(gè)操作性連接在編碼成熟溶葡萄球菌素內(nèi)肽酶的核苷酸序列上的T7φ10啟動(dòng)子/1ac操縱子;(b)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞使其含有和表達(dá)步驟(a)的遺傳構(gòu)建體,這樣不含前溶葡萄球菌素原和溶葡萄球菌素原的成熟溶葡萄球菌素在宿主胞漿中積累;以及(c)從宿主細(xì)胞中分離出成熟溶葡萄球菌素。
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摘要
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克隆了模仿葡萄球菌(staphylococcus simulans)溶葡萄球菌素基因的一部分并且在前溶葡萄球菌素原和溶葡萄球菌素原不存在的條件下在大腸桿菌胞漿中過度表達(dá),從而產(chǎn)生成熟溶葡萄球菌素,其表達(dá)在IPTG誘導(dǎo)型啟動(dòng)子和核糖體結(jié)合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄控制下。被轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的IPTG誘導(dǎo)在完全缺失前溶葡萄球菌素原和溶葡萄球菌素原的條件下產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)的可溶成熟溶葡萄球菌素(27KDa)。如此形成的成熟溶葡萄球菌素不需要翻譯后修飾。如此形成的成熟溶葡萄球菌素可以用于治療和預(yù)防葡萄球菌感染。
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國(guó)際公布
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2001-04-26 WO2001/029201 英
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