公開(公告)號(hào)
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CN1238523C
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公開(公告)日
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2006.01.25
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410008726.6
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申請(qǐng)日期
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2004.03.16
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專利名稱
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用基因靶標(biāo)篩選具有降低血脂中膽固醇組分的方法
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主分類號(hào)
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C12Q1/68(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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信學(xué)雷;李維琪;陳志慧;劉云英;麥迪娜;張?jiān)品?
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地址
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830011新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市北京南路40號(hào)附1號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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烏魯木齊中科新興專利事務(wù)所
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代理人
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張 莉
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國省代碼
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新疆;65
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主權(quán)項(xiàng)
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一種用基因靶標(biāo)篩選具有降低血脂中膽固醇組分的方法,其特征在于,按下例步驟進(jìn)行:a、采用常規(guī)獲得目的基因的方法,獲得載脂蛋白ApoAI和清道夫受體SR-BI基因,并且將其作為藥物篩選靶標(biāo);b、采用常規(guī)方法將載脂蛋白ApoAI和清道夫受體SR-BI基因構(gòu)建酵母載體,利用酵母雙雜交系統(tǒng),并用報(bào)告基因和酵母交配證實(shí)相互作用的存在;c、選擇酵母雙雜交系,用正常的菌株或交配的二倍體菌株檢驗(yàn)具有降低血脂中膽固醇組分的毒性,只有對(duì)酵母菌株生長(zhǎng)影響不大時(shí)才能用于檢測(cè);d、以報(bào)告基因所表達(dá)的α、β-半乳糖苷酶定量檢測(cè)了載脂蛋白ApoAI和清道夫受體SR-BI間存在相互作用強(qiáng)弱,運(yùn)用已知降脂藥及在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證明有效的藥物為陽性對(duì)照,檢驗(yàn)該篩藥系統(tǒng)的有效性,定量地比較各種組分在降低血脂中膽固醇能力的差別。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種用基因靶標(biāo)篩選具有降低血脂中膽固醇組分的方法,該方法首先從大鼠肝臟總RNA用RT-PCR方法獲得了wistar大鼠的載脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受體(SR-BI)基因的全長(zhǎng)cDNA,并將其克隆入酵母表達(dá)載體,利用報(bào)告基因、省卻培養(yǎng)基、酵母交配證實(shí)了在載脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受體(SR-BI)間存在相互作用,以報(bào)告基因所表達(dá)的α、β-半乳糖苷酶定量檢測(cè)了載脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受體(SR-BI)間存在相互作用強(qiáng)弱,并運(yùn)用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證明有效的藥物為陽性對(duì)照,檢驗(yàn)了該方法,證明該方法有效,可用于在基因水平上篩選和評(píng)價(jià)具有調(diào)脂效果的關(guān)鍵組分。該方法成本低廉,高效準(zhǔn)確,又可部分揭示了藥物降低膽固醇的作用機(jī)理。
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國際公布
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