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一種檢測(cè)拉米夫定耐藥HBVDNA的方法及試劑盒

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1710098A  
公開(kāi)(公告)日 2005.12.21  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410025199.X  
申請(qǐng)日期 2004.06.16  
專利名稱 一種檢測(cè)拉米夫定耐藥HBV DNA的方法及試劑盒  
主分類號(hào) C12Q1/68  
分類號(hào) C12Q1/68  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 何劍軍;周 煜;夏 懿  
地址 200233上海市宜山路1289號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海光華專利事務(wù)所  
代理人 余明偉  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種檢測(cè)拉米夫定耐藥HBVDNA的方法,其特征在于使用以下多聚核苷酸:引物15’TGTATTCCCATCCCATCATCCT3’、引物25’ATGTTGTACAGATTTGGTCCC3’、引物35’TTGGCTTCCAGTACCACATCATC3’、引物45’CCCCAGTACCACATCATCA3’、引物55’CCCAGAACCACATCATCA3’、引物65’CCCAGTACCACATCATTCAC3’、引物75’CCCAGAACCACATCATTCAC3’、探針15’TCCTATGGGAGTGGGCCTCAG3’、探針25’CCATTTGTTCGGTGGTTCGTAG3’、探針35’ACCACATCATCAATATAACTGAAAGCC3’、或探針45’ACCACATCATCCACATAACTGAAAGC3’、或者與上述序列同源性大于75%的序列、或者上述所有序列的堿基互補(bǔ)序列,使用其中的任意一種或一種以上的組合。  
摘要 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)HBV DNA的方法及其試劑盒,特別是涉及拉米夫定耐藥性的檢測(cè)。根據(jù)耐藥相關(guān)兩種主要的突變基因(YMDD突變?yōu)閅VDD和YIDD)設(shè)計(jì)特異性突變檢測(cè)引物和病毒特異性引物及公用的配套探針,或設(shè)計(jì)特異性突變檢測(cè)探針和病毒特異性檢測(cè)探針,分別在三個(gè)PCR管中通過(guò)相同的PCR程序?qū)ν粯颖具M(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。根據(jù)I反應(yīng)管、V反應(yīng)管檢測(cè)Ct值分別與C反應(yīng)管檢測(cè)Ct值的差值(ΔCt-i=Ct-i-Ct-c,ΔCt-v=Ct-v-Ct-c),對(duì)臨床樣本中HBV病毒發(fā)生YVDD和YIDD耐藥突變情況進(jìn)行判斷。本發(fā)明的試劑盒性能穩(wěn)定、靈敏度高于測(cè)序,能更精確判斷耐藥和敏感病毒的共存比例關(guān)系,適用于對(duì)耐藥病毒和總病毒數(shù)量關(guān)系進(jìn)行半定量分析。  
國(guó)際公布  
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