公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1710098A
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公開(kāi)(公告)日
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2005.12.21
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410025199.X
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申請(qǐng)日期
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2004.06.16
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專利名稱
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一種檢測(cè)拉米夫定耐藥HBV DNA的方法及試劑盒
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主分類號(hào)
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C12Q1/68
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分類號(hào)
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C12Q1/68
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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何劍軍;周 煜;夏 懿
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地址
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200233上海市宜山路1289號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海光華專利事務(wù)所
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代理人
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余明偉
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國(guó)省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種檢測(cè)拉米夫定耐藥HBVDNA的方法,其特征在于使用以下多聚核苷酸:引物15’TGTATTCCCATCCCATCATCCT3’、引物25’ATGTTGTACAGATTTGGTCCC3’、引物35’TTGGCTTCCAGTACCACATCATC3’、引物45’CCCCAGTACCACATCATCA3’、引物55’CCCAGAACCACATCATCA3’、引物65’CCCAGTACCACATCATTCAC3’、引物75’CCCAGAACCACATCATTCAC3’、探針15’TCCTATGGGAGTGGGCCTCAG3’、探針25’CCATTTGTTCGGTGGTTCGTAG3’、探針35’ACCACATCATCAATATAACTGAAAGCC3’、或探針45’ACCACATCATCCACATAACTGAAAGC3’、或者與上述序列同源性大于75%的序列、或者上述所有序列的堿基互補(bǔ)序列,使用其中的任意一種或一種以上的組合。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種檢測(cè)HBV DNA的方法及其試劑盒,特別是涉及拉米夫定耐藥性的檢測(cè)。根據(jù)耐藥相關(guān)兩種主要的突變基因(YMDD突變?yōu)閅VDD和YIDD)設(shè)計(jì)特異性突變檢測(cè)引物和病毒特異性引物及公用的配套探針,或設(shè)計(jì)特異性突變檢測(cè)探針和病毒特異性檢測(cè)探針,分別在三個(gè)PCR管中通過(guò)相同的PCR程序?qū)ν粯颖具M(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。根據(jù)I反應(yīng)管、V反應(yīng)管檢測(cè)Ct值分別與C反應(yīng)管檢測(cè)Ct值的差值(ΔCt-i=Ct-i-Ct-c,ΔCt-v=Ct-v-Ct-c),對(duì)臨床樣本中HBV病毒發(fā)生YVDD和YIDD耐藥突變情況進(jìn)行判斷。本發(fā)明的試劑盒性能穩(wěn)定、靈敏度高于測(cè)序,能更精確判斷耐藥和敏感病毒的共存比例關(guān)系,適用于對(duì)耐藥病毒和總病毒數(shù)量關(guān)系進(jìn)行半定量分析。
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國(guó)際公布
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