| 公開(公告)號 | CN1706938A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號 | CN200410043612.5 |
| 申請日期 | 2004.06.09 |
| 專利名稱 | A-NK細(xì)胞分離培養(yǎng)方法 |
| 主分類號 | C12N5/08 |
| 分類號 | C12N5/08;A61K35/12 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)腫瘤病防治研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王志華 |
| 地址 | 150040黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)哈平路150號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 黑龍江;23 |
| 主權(quán)項 | 一種A-NK細(xì)胞分離培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)過程中：在A-NK細(xì)胞分離方法的改進(jìn)中用苯丙氨酸甲酯(PME)可有效去除單核巨噬細(xì)胞而不改變淋巴細(xì)胞的表型和細(xì)胞毒性。具體方法是取健康人外周血，肝素抗凝，用PBS二倍稀釋后，用人淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心，2000轉(zhuǎn)/分，20分鐘，吸取中界面層的單個核細(xì)胞用PBS洗滌三次。然后，置于塑料管中用PME(5mmol/L)室溫處理40分鐘(5×106/ml)，以去除B細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞，將PME處理過的已去除單核巨噬細(xì)胞的PBMC調(diào)細(xì)胞濃度為5×106/ml置于完全培養(yǎng)液中，與22nM(6000IU/ml)IL-2共同培養(yǎng)4-5小時后，收集粘附于塑料培養(yǎng)瓶表面的細(xì)胞(即A-NK細(xì)胞)進(jìn)行臨床治療，將收集細(xì)胞的時間從傳統(tǒng)的24-48小時縮小到3-5小時；在A-NK細(xì)胞培養(yǎng)方法的改進(jìn)中，無血清培養(yǎng)基可替代含血清的完全培養(yǎng)基，二者所得培養(yǎng)物的數(shù)目和功能相當(dāng)。發(fā)展無血清培養(yǎng)基用于A-NK細(xì)胞的臨床生物治療，即不減少A-NK細(xì)胞的數(shù)量和活性，又能增加其臨床應(yīng)用的安全性；IL-4可聯(lián)合IL-2對A-NK細(xì)胞的生長有較強(qiáng)的刺激或成熟作用；IL-2和IL-12聯(lián)合應(yīng)用可提高活化免疫細(xì)胞的殺傷活性。 |
| 摘要 | A-NK細(xì)胞分離培養(yǎng)方法是一種醫(yī)學(xué)腫瘤生物治療學(xué)的方法。用如下方法對A-NK細(xì)胞分離培養(yǎng)進(jìn)行了改進(jìn)。用苯丙氨酸甲酯(PME)去除單核巨噬細(xì)胞而不改變淋巴細(xì)胞的表型和細(xì)胞毒性；在A-NK細(xì)胞培養(yǎng)方法的改進(jìn)中，無血清培養(yǎng)基可替代含血清的完全培養(yǎng)基，二者所得培養(yǎng)物的數(shù)目和功能相當(dāng)，發(fā)展無血清培養(yǎng)基用于A-NK細(xì)胞的臨床生物治療，即不減少A-NK細(xì)胞的數(shù)量和活性，又能增加其臨床應(yīng)用的安全性；IL-4可聯(lián)合IL-2對A-NK細(xì)胞的生長有較強(qiáng)的刺激或成熟作用；IL-2和IL-12聯(lián)合應(yīng)用可提高活化免疫細(xì)胞的殺傷活性。 |
| 國際公布 |
