| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1223675C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.10.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03115299.6 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.01.30 |
| 專利名稱 | 一種抗腫瘤免疫活性細(xì)胞－DCIK細(xì)胞、其制備方法及應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C12N5/00 |
| 分類號(hào) | C12N5/00;C12N5/08;A61K45/00;A61P37/02;A61P35/00 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 徐永華;王恩忠 |
| 地址 | 200031 上海市岳陽(yáng)路320號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海智信專利代理有限公司 |
| 代理人 | 肖劍南 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種DCIK細(xì)胞的制備方法，其特征在于包括以下步驟：a、PBMC的制備用生理鹽水對(duì)倍稀釋20～50ml腫瘤病人的抗凝外周血，用比重為1.077的淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC，分離所用離心機(jī)之轉(zhuǎn)頭為水平轉(zhuǎn)頭，離心速度為2000rpm，離心20～25分鐘，然后用Hanks平衡液洗滌PBMC2次，再進(jìn)行顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)，最后用淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液AIM-V調(diào)節(jié)細(xì)胞密度成3～5×106/ml的細(xì)胞懸液；b、PBL和粘附細(xì)胞的分離將細(xì)胞懸液移入6孔板，置37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱溫育2小時(shí)，然后用移液管輕輕沖吸細(xì)胞，將非粘附PBL懸液收集在離心管中，6孔板中留下的粘附細(xì)胞作誘導(dǎo)DC用；c、CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)和擴(kuò)增在上述PBL懸液中添加重組人IFN-γ終濃度為1000u/ml，然后移入培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中溫育24小時(shí)，之后，每瓶添加鼠抗人CD3單克隆抗體，IL-1和IL-2，終濃度分別為50ng/ml，100u/ml和500u/ml；或者采用固相CD3單抗刺激的方法，即將全部細(xì)胞懸液移入CD3單抗包被過(guò)的培養(yǎng)瓶中，再添加IL-1和IL-2，終濃度分別為100u/ml和500u/ml，繼續(xù)培養(yǎng)48～72小時(shí)后顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后用CIK細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為3×105/ml，分配到25cm2培養(yǎng)瓶中，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，此后，每隔48或72小時(shí)按上述相同條件擴(kuò)大培養(yǎng)一次，培養(yǎng)至第8天時(shí)收集CIK細(xì)胞待用；d、DC誘導(dǎo)和擴(kuò)增在前述留有粘附細(xì)胞的6孔板中加入DC培養(yǎng)液，37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)5天，然后在各孔添加自體瘤細(xì)胞裂解液，使裂解液蛋白終濃度為10-50ug/ml，繼續(xù)培養(yǎng)2～3天后，用移液管沖吸和收集非粘附和半粘附性DC細(xì)胞待用；e、DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)制備DCIK細(xì)胞培養(yǎng)7～8天的DC和CIK細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)，離心棄上清后，分別用CIK培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為6×105/ml和2×105/ml，等體積混合后移入培養(yǎng)瓶中，置37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔48～72小時(shí)按4×105/ml的起始細(xì)胞密度分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)一次。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種抗腫瘤免疫活性細(xì)胞-DCIK細(xì)胞、其制備方法及應(yīng)用，主要是利用細(xì)胞因子誘導(dǎo)DC和CIK細(xì)胞，然后用腫瘤抗原沖擊DC細(xì)胞，將經(jīng)抗原沖擊過(guò)的DC與CIK細(xì)胞按一定比例混合進(jìn)行共培養(yǎng)，得到一種新的免疫效應(yīng)細(xì)胞群，即DCIK細(xì)胞。本發(fā)明的DCIK細(xì)胞與CIK細(xì)胞比較，增殖活性和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)，且表現(xiàn)對(duì)惡性細(xì)胞的特異性殺傷。上述DCIK細(xì)胞主要用于自體瘤治療，術(shù)后即時(shí)施治能有效防轉(zhuǎn)移防復(fù)發(fā)，也可作化學(xué)療法的輔助治療，此外，DCIK細(xì)胞也可用于某些傳染性疾病的免疫治療。 |
| 國(guó)際公布 |
