| 公開(公告)號 | CN1211400C |
| 公開(公告)日 | 2005.07.20 |
| 申請(專利)號 | CN01141897.4 |
| 申請日期 | 2001.09.18 |
| 專利名稱 | 人血小板糖蛋白GPIbα的制備方法及其專用引物 |
| 主分類號 | C07K14/435 |
| 分類號 | C07K14/435;C12N15/09;C12N15/11;C12P21/02 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張克強;王字玲;王波 |
| 地址 | 100850 北京市海淀區(qū)太平路27號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 關(guān)暢 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種制備人血小板糖蛋白GPIbα的方法，包括以下步驟：1)合成引物：上游：5’-CGCGGATCCATGCCTCTCCTCCTCTTGCTG-3’下游：5’-CCGGAATTCTCAGAGGCTGTGGCCAGAGTACC-3’；2)以細(xì)胞總RNA為模板利用RT-PCR釣取GPIbα的全長cDNA；所述細(xì)胞是人紅白血病細(xì)胞系TF-I細(xì)胞株；所述RT-PCR的條件是：50℃，30Min；94℃，2Min；94℃變性45s，50℃退火45s，68℃延伸2Min，10個循環(huán)；后在94℃變性45s，58℃退火45s，68℃延伸2Min，25個循環(huán)；68℃延伸7Min；3)將全長cDNA插入經(jīng)BamHI和EcoRI雙酶切處理后的真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)，獲得重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-GPF；4)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入真核細(xì)胞中；5)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞；6)收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞分泌的人血小板糖蛋白GPIbα，以凝血酶親合柱純化，得到產(chǎn)品。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人血小板糖蛋白GPIbα的制備方法及其專用引物。本發(fā)明提供的制備人血小板糖蛋白GPIbα的方法，包括以下步驟：1)合成引物：上游：5’-CGCGGATCCATGCCTCTCCTCCTCTTGCTG-3’；下游：5’-CCGGAATTCTCAGAGGCTGTGGC CAGAGTACC-3’；2)以細(xì)胞總RNA為模板利用RT-PCR釣取GPIbα的全長cDNA；3)將全長cDNA插入經(jīng)BamH I和EcoR I雙酶酶切處理后的真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)，獲得真核表達重組質(zhì)粒pcDNA3.1-GPF；4)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入真核細(xì)胞中；5)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞；6)收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞分泌的人血小板糖蛋白GPIbα，以凝血酶親合柱純化，得到產(chǎn)品。本發(fā)明為進一步開發(fā)新型血小板代用品以及診斷、檢測和治療血管內(nèi)創(chuàng)傷的診斷試劑提供了堅實的理論及必要的原材料基礎(chǔ)。 |
| 國際公布 |
