| 公開(公告)號 | CN1189559C |
| 公開(公告)日 | 2005.02.16 |
| 申請(專利)號 | CN03114511.6 |
| 申請日期 | 2003.02.28 |
| 專利名稱 | 一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的方法 |
| 主分類號 | C12N9/74 |
| 分類號 | C12N9/74;C07K1/18 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 邊六交;祁淼 |
| 發(fā)明(設計)人 | 邊六交;楊曉燕;董妍;祁淼 |
| 地址 | 710043 陜西省西安市高新開發(fā)區(qū)東區(qū)3號4層 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 西安通大專利代理有限責任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項 | 一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的方法，其特征在于，采用陽離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時顯示紫外和電導參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進行；活性測定參照胰蛋白酶測定法，用BAEE作底物；具體步驟如下：1).江浙產(chǎn)蝮蛇抗栓酶的等電點在4～5左右，選擇在它的等電點附近酸堿度的溶樣液，首先使類凝血酶在溶樣液中以陽離子蛋白質(zhì)形式存在，然后選擇一種可以與這樣帶電蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的陽離子交換介質(zhì)進行梯度洗脫，收集活性峰；2).陽離子交換收集的含有類凝血酶活性的餾分經(jīng)稀釋和調(diào)pH值后，上陰離子交換柱，稀釋后含NaCl在0.05M以下，pH在8.5左右，陰離子交換層析的A液可選用pH在8.5左右的PBS緩沖液或Tris-HCl緩沖液，B液為在A液中加入0.6-0M左右的NaCl溶液，梯度方式為洗脫液從A液完全變到B液時，至少沖洗10個柱體積以上，介質(zhì)選擇商品化的陰離子交換介質(zhì)，收集陰離子層析后含類凝血酶的活性峰；3).將陰離子交換收集的含類凝血酶的活性餾分直接上凝膠層析，收集含類凝血酶的餾分，流動相選用pH5.0-9.0的HAC-NaAC或PBS緩沖液，濃度在10mM-50mM之間，用等度洗脫，介質(zhì)選用商品化的凝膠介質(zhì)；4)對最后一步的最大活性峰作SDS-PAGE電泳和HPLC檢測，其純度分別約為98％和95％，脫鹽凍干后可得純類凝血酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的方法，采用陽離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時顯示紫外和電導參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進行；活性測定參照胰蛋白酶測定法，用BAEE作底物。本發(fā)明可以方便、快速地從蛇毒中提取類凝血酶，其純度和生物活性均可達到藥用標準。與傳統(tǒng)方法相比較，本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡單，回收率高，活性損失小，并可幾乎線性放大到工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
