公開(公告)號
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CN1181207C
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公開(公告)日
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2004.12.22
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申請(專利)號
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CN01124108.X
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申請日期
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2001.08.13
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專利名稱
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細胞培養(yǎng)生產(chǎn)新疆雪蓮總黃酮的方法
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主分類號
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C12P17/06
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分類號
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C12P17/06;C12N5/04;A01H4/00
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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沈陽聯(lián)美植物細胞工程有限公司
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發(fā)明(設計)人
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賈景明;張劍俠;吳立軍
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地址
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110179 遼寧省沈陽市渾南高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)21世紀大廈1709房間
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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北京太兆天元知識產(chǎn)權代理有限責任公司
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代理人
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張韜
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國省代碼
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遼寧;21
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主權項
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一種新疆雪蓮總黃酮的制備方法,其特征在于該方法為:以新疆雪蓮高產(chǎn)細胞株作為種子,種子的保藏號是CGMCC 0610,采用氣升式細胞反應器作種子罐,培養(yǎng)10-15天,培養(yǎng)條件為:溫度22-26℃,光照時間為8小時/天,光照強度800-2000LX;以氣升式細胞反應器作為生產(chǎn)罐;培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度24±1℃,光照8h/d,光照強度1000LX,培養(yǎng)時間10-15天;其培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基,并添加萘乙酸0-3.5mg/L,6-芐基嘌呤0-3.0mg/L,蔗糖1.5-2.5%,并調(diào)PH值4.5-7.5;細胞培養(yǎng)液下罐后,將雪蓮培養(yǎng)品60℃減壓干燥至恒重,研磨成粉,取粉末1.0重量份,置100體積份容器,加100體積甲醇,即其中稱取的雪蓮培養(yǎng)品與所用甲醇的配比是1.0克雪蓮粉:100毫升甲醇,放置24小時,超聲萃取40分鐘,濾過,回收甲醇,殘渣加適量水3~5體積份使溶解,難溶部分超聲溶解,放冷;通過60~85目、10g、內(nèi)徑1cm、長度15cm的聚酰胺層析柱,濕法裝柱;以水50體積份洗脫,棄去水液,再用50%乙醇100體積份洗脫,收集洗脫液,并定容至100體積份,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,棄去初濾液,取續(xù)濾液,上色譜柱,以40∶60∶1.0的甲醇∶水∶冰醋酸為流動相;檢測波長257nm,流量1.0ml/min,靈敏度0.02AUFS,柱溫室溫,進樣量10μl,進行分離,收集獲得總黃酮晶體。
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摘要
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本發(fā)明提供了一種采用氣升式生物反應器大規(guī)模培養(yǎng)新疆雪蓮,從培養(yǎng)液中分離提取新疆雪蓮總黃酮的方法。該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)酵的種子,再將種子轉(zhuǎn)移到20L生物反應器中進行大規(guī)模培養(yǎng)。然后對反應器中的培養(yǎng)液進行分離、純化獲取新疆雪蓮總黃酮7.1%,純度99%本發(fā)明方法生產(chǎn)成本低,不污染環(huán)境,達到了產(chǎn)業(yè)化水平。
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國際公布
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