公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1552853A
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公開(kāi)(公告)日
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2004.12.08
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN03129106.6
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申請(qǐng)日期
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2003.06.05
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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雜交瘤細(xì)胞表達(dá)基因工程尿激酶原的制備方法
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主分類(lèi)號(hào)
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C12N9/72
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分類(lèi)號(hào)
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C12N9/72;C12N15/58;C12N5/12
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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上海實(shí)業(yè)科華生物藥業(yè)有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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王 縵;顧燕黎;李 慶;吳利紅;許 琦
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地址
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200233上海市欽州北路1189號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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上海市華誠(chéng)律師事務(wù)所
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代理人
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徐申民
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國(guó)省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種雜交瘤細(xì)胞表達(dá)基因工程人糖基化尿激酶原的制備方法,包括:將包含尿激酶原cDNA序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雜交瘤細(xì)胞并篩選高表達(dá)尿激酶原的雜交瘤細(xì)胞工程細(xì)胞株;培養(yǎng)尿激酶原工程細(xì)胞株;和工程細(xì)胞株培養(yǎng)上清的純化,其特征在于:所述培養(yǎng)尿激酶原工程細(xì)胞株是將尿激酶原工程細(xì)胞株先用有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)至足夠量后,轉(zhuǎn)入生物反應(yīng)器內(nèi),接種細(xì)胞密度2-4×105個(gè)/毫升,隨后降低胎牛血清濃度進(jìn)行低血清培養(yǎng),待細(xì)胞密度上升到2-2.5×106個(gè)/毫升后開(kāi)始無(wú)血清灌注培養(yǎng),通過(guò)調(diào)節(jié)灌注量來(lái)始終確保細(xì)胞密度不低于1×106個(gè)/毫升,并收集培養(yǎng)上清。
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摘要
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本發(fā)明提供一種雜交瘤細(xì)胞表達(dá)尿激酶原的制備方法,該方法中尿激酶原工程細(xì)胞株的培養(yǎng)是將尿激酶原工程細(xì)胞株先用有血清培養(yǎng),至細(xì)胞密度上升到2-4×105個(gè)/毫升后,轉(zhuǎn)入生物反應(yīng)器內(nèi),并降低胎牛血清濃度,待細(xì)胞密度上升到2-2.5×106個(gè)/毫升后開(kāi)始無(wú)血清灌注培養(yǎng),通過(guò)調(diào)節(jié)灌注量來(lái)始終確保細(xì)胞密度不低于1×106個(gè)/毫升,并收集培養(yǎng)上清進(jìn)行純化。本發(fā)明還提供了一種直接采用上述方法中經(jīng)全無(wú)血清灌注培養(yǎng)制得的工程細(xì)胞株先進(jìn)行有血清復(fù)蘇,然后進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng),再進(jìn)行全無(wú)血清灌注培養(yǎng)并收集培養(yǎng)上清進(jìn)行純化的制備尿激酶原的方法。
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國(guó)際公布
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