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液-固萃取體系分離純化血紅蛋白的方法

公開(公告)號 CN1169836C  
公開(公告)日 2004.10.06  
申請(專利)號 CN02115705.7  
申請日期 2002.04.11  
專利名稱 液-固萃取體系分離純化血紅蛋白的方法  
主分類號 C07K14/805  
分類號 C07K14/805;C07K1/14  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中南民族大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計)人 李步海;孫小梅;沈靜茹;雷灼霖  
地址 430074 湖北省武漢市民院路5號中南民族大學(xué)科研處  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 武漢開元專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 王和平  
國省代碼 湖北;42  
主權(quán)項 一種液-固萃取體系分離純化血紅蛋白的方法,包括如下步驟:(1)、在具塞比色管中,加入硫酸銨或磷酸鉀,pH控制在3.0~9.0,加入成相聚合物吐溫80溶液和聚乙二醇(PEG)8000或聚乙二醇(PEG)6000與亞胺基二乙酸(IDA)組成的修飾物溶液,然后加入血樣,用二次水定容,置于康氏電動震蕩機(jī)上,平置振蕩2-10分鐘,取下倒置10-20分鐘,體系分成聚合物固相和鹽水液相,血紅蛋白被萃入固相;(2)、在上述固相加二次水溶解后,加入乙二胺四乙酸和硫酸銨或磷酸鉀,置于康氏電動震蕩機(jī)上,平置振蕩2-10分鐘,取下倒置10-20分鐘,體系分成聚合物固相和鹽水液相,血紅蛋白被反萃入液相;(3)、將上述萃入液相的血紅蛋白置于透析袋中進(jìn)行透析,小分子的鹽、少量聚合物可以通過透析袋,而留在透析袋中血紅蛋白大分子,其純度可達(dá)到99%以上。  
摘要 本發(fā)明涉及一種用液-固萃取體系從血液中分離純化血紅蛋白的方法。本發(fā)明方法所需設(shè)備簡單,分離純化成本低,速度快,成相容易,成相后直接傾出液相即可使液固兩相分離,無須雙水相萃取中的離心等操作,不用有機(jī)溶劑,無毒性,成相聚合物及鹽對蛋白質(zhì)有穩(wěn)定和保護(hù)作用。萃取分離選擇性好,萃取容量大,是易于規(guī)模放大分離純化血紅蛋白的新技術(shù)。本發(fā)明用PEG修飾物混合聚合物-鹽-水液-固萃取體系對豬血、牛血、人血中血紅蛋白進(jìn)行萃取,經(jīng)過一次萃取,一次反萃和透析即可得到純度大于99%的血紅蛋白的水溶液。  
國際公布  
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