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一種構(gòu)建人載脂蛋白AIm表達基因的制備方法

公開(公告)號 CN1519321A  
公開(公告)日 2004.08.11  
申請(專利)號 CN03150703.4  
申請日期 2003.09.01  
專利名稱 一種構(gòu)建人載脂蛋白AIm表達基因的制備方法  
主分類號 C12N15/12  
分類號 C12N15/12;C12N15/63;C12P21/00  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 上海凱曼生物科技有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 龔邦強;丁滿生;張梅芳  
地址 200233上海市漕河涇高科技開發(fā)區(qū)田林路219號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 上海開祺專利代理有限公司  
代理人 費開逵  
國省代碼 上海;31  
主權(quán)項 一種獲得高活性的人載脂蛋白pro-ApoAIm的制備方法由下列步驟組成:a、設(shè)計pApoAIm PCR引物核苷酸序列制成pro-ApoAIm基因;b、構(gòu)建表達基因PET12a/PApOAIm重組質(zhì)粒;c、工程菌構(gòu)建;d、構(gòu)建的工程發(fā)酵;e、pro-ApoAIm蛋白的純化;f、pro-ApoAIm蛋白二聚體的制備。  
摘要 本發(fā)明公開了一種構(gòu)建人載脂蛋白AImilano表達基因的制備方法。該方法采用PCR引物制成pro-ApoAIm的基因,構(gòu)建表達基因PET12a/PAPOAIm重組質(zhì)粒再進行工程菌的構(gòu)建,然后構(gòu)建的工程菌在一定的發(fā)酵條件下發(fā)酵,進行pApoAIm的蛋白純化,純化的蛋白再制成pro-ApoAIm蛋白二聚體形式。本方法具有pro-ApoAIm比ApoAIm性質(zhì)更穩(wěn)定,在大腸桿菌表達體系中采用T7啟動子表達載體pET12a,用IPTG誘導(dǎo)目的蛋白的生產(chǎn),產(chǎn)生蛋白是包涵體,它能有效防止蛋白水解酶對異源蛋白的水解等特點。  
國際公布  
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