公開(kāi)(公告)號(hào)
|
CN1513481A
|
公開(kāi)(公告)日
|
2004.07.21
|
申請(qǐng)(專利)號(hào)
|
CN03132902.0
|
申請(qǐng)日期
|
2003.07.17
|
專利名稱
|
非特異免疫激活劑的制備方法
|
主分類號(hào)
|
A61K35/74
|
分類號(hào)
|
A61K35/74;A61K38/16;A61K9/19;A61P37/04;A23K1/16;C12P1/04;C12P21/00
|
分案原申請(qǐng)?zhí)? |
|
優(yōu)先權(quán)
|
2003.7.9 CN 03138801.9
|
申請(qǐng)(專利權(quán))人
|
中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
|
發(fā)明(設(shè)計(jì))人
|
王秀華;黃倢;宋曉玲;楊冰;;劉莉
|
地址
|
266071山東省青島市南京路106號(hào)
|
頒證日
|
|
國(guó)際申請(qǐng)
|
|
進(jìn)入國(guó)家日期
|
|
專利代理機(jī)構(gòu)
|
青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司
|
代理人
|
韓振東
|
國(guó)省代碼
|
山東;37
|
主權(quán)項(xiàng)
|
一種非特異免疫激活劑的制備方法,包括經(jīng)厭氧發(fā)酵培養(yǎng),再?gòu)陌l(fā)酵液中分離收集菌體,獲取菌體細(xì)胞壁中的活性非特異免疫激活制劑的過(guò)程,其特征在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)的菌種是雙歧桿菌DSM 20210,或雙歧桿菌ATCC25866,或雙歧桿菌ATCC25867,或雙歧桿菌ATCC25525;所述獲取菌體細(xì)胞壁中的活性非特異免疫激活制劑的過(guò)程是:(1).收集菌體:取發(fā)酵完成的菌液,經(jīng)4000-8000g、4℃的離心處理20-30分鐘,棄去上清液,保留收集的該菌體沉淀,再用0.8%生理鹽水洗滌至該菌體為白色;(2).裂解細(xì)胞:按1∶4(g/ml)的比例,將白色的該菌體與細(xì)胞裂解劑混合,并置入95℃水浴中,恒溫處理且連續(xù)攪拌1小時(shí),再立即冷卻至室溫,并用雙蒸水徹底洗滌;(3).四次洗滌離心除去裂解劑:用濃度梯度的甲醇水溶液對(duì)經(jīng)(2).步處理的菌體,分別進(jìn)行三次洗滌、離心處理,其中離心是以5000-6000g,分步按濃度梯度洗滌處理;之后用丙酮洗滌,且經(jīng)4000-5000g的離心處理,再將收集的該菌體沉淀進(jìn)行0~4℃的低溫干燥處理;(4).水解預(yù)處理:將(3).中得到的干燥產(chǎn)物,按每500g該產(chǎn)物加1L的pH6.2磷酸鹽緩沖液和0.3gEDTA液的比例,配制混合液,保持恒溫80℃達(dá)4小時(shí),再冷卻至37℃;(5).酶解處理:向(4).中冷卻的混合液中加入適量1-5g/L的溶菌酶,保持恒溫37℃下作用24小時(shí);之后補(bǔ)加1-3g/L的溶菌酶,37℃下處理12小時(shí);(6).再次酶解處理:用適量2-5g/L的蛋白酶加入到溶菌的該混合液中,在50℃溫度下處理24小時(shí),即得到含有效活性濃度為0.4-0.8%的寡糖肽類和含有丙氨酸∶谷氨酸∶賴氨酸∶甘氨酸的摩爾數(shù)比=3∶1∶1∶1的組合物,該組合物是具有淡甜香氣味的黃褐色液體——非特異免疫激活劑主料制劑;或?qū)⒃擖S褐色液體干燥處理,即得到性狀具有特殊甜香氣味的,深褐色的粘稠物——含有效濃度為4-8%的寡糖肽類活性成分的和含有丙氨酸∶谷氨酸∶賴氨酸∶甘氨酸的摩爾數(shù)比=3∶1∶1∶1的組合物——非特異免疫激活劑粗品制劑。
|
摘要
|
一種非特異免疫激活劑的制備方法,包括經(jīng)厭氧發(fā)酵,從發(fā)酵液中分離菌體,獲取菌體細(xì)胞壁中的非特異免疫激活制劑的過(guò)程。該發(fā)酵菌種是雙歧桿菌DSM 20210,或雙歧桿菌ATCC25866,或雙歧桿菌ATCC25867,或雙歧桿菌ATCC25525。獲取該制劑的過(guò)程:(1).收集菌體;(2).裂解細(xì)胞;(3).四次洗滌離心除去裂解劑;(4).水解預(yù)處理;(5).酶解處理;(6).再次酶解處理;從而制成非特異免疫激活劑主料制劑或粗料制劑作為魚、蝦、貝類的飼料添加劑,用于激活養(yǎng)殖生物的非特異免疫力,達(dá)到促進(jìn)對(duì)魚、蝦、貝類的抗病原生物的能力,促進(jìn)魚、蝦、貝類的生長(zhǎng)發(fā)育,提高了飼料轉(zhuǎn)化率及水生養(yǎng)殖動(dòng)物育苗期成活率。該激活劑干粉制劑作為水生脊椎動(dòng)物注射用激活劑,可增強(qiáng)魚類頭腎細(xì)胞吞噬活力,增加抗病力。
|
國(guó)際公布
|
|