| 公開(公告)號(hào) | CN1514024A |
| 公開(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03139010.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.08.19 |
| 專利名稱 | 應(yīng)用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 山東省血液中心 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 丁培芳;王勤友;孫汶生;申法奎;王謝桐;;張雪芹;滕彬 |
| 地址 | 250014山東省濟(jì)南市山師東路22號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 濟(jì)南三達(dá)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 李健康 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種應(yīng)用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法，由以下步驟組成：(1)樣品制備：選擇有血友病A(HA)家族史的女性于妊娠20周后，在超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮抽取胎兒臍帶靜脈血0.9ml或8ml，立即與O.1ml或0.2ml3.8％枸櫞酸鈉抗凝劑混勻，同時(shí)以相同方法和用量抽取攜帶者及其丈夫和正常人外周靜脈血作對(duì)照；(2)離心：將上述樣品于4℃條件下，以2400～2500轉(zhuǎn)/分鐘離心20～25分鐘，取上層1/3～2/3血漿進(jìn)行凝血因子VIII活性(FVIII：C)和血管性血友病因子(vWF)血清學(xué)的生化測定；取白細(xì)胞層提取DNA進(jìn)行PCR聯(lián)合基因診斷；(3)篩選分型：依據(jù)上述測定的血漿凝血因子VIII活性和血管性血友病因子濃度，確診血友病A患者及其攜帶者，并根據(jù)血漿FVIII：C濃度將血友病A患者分為重型HA，其FVIII：C＜1％；中型HA，其FVIII：C1％～5％；輕型HA，其FVIII：C5％～25％、亞臨床型HA，其FVIII：C25％～45％；(4)直接基因診斷：應(yīng)用長距離PCR(LD-PCR)技術(shù)對(duì)上述樣品提取的DNA進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷，根據(jù)電泳條帶的大小和分子量的大小綜合判定患者是否存在FVIII基因內(nèi)含子22倒位；若只出現(xiàn)12Kb帶，判為野生型即非倒位；若只出現(xiàn)11Kb帶，判為倒位患者；若出現(xiàn)12Kb和11Kb兩條帶，判為倒位的攜帶者；(5)阻斷HA致病基因傳遞：對(duì)于上述判為倒位的患者或判為倒位的攜帶者，應(yīng)終止妊娠，切斷HA致病基因的傳遞；(6)間接基因診斷：對(duì)上述非倒位的重型HA、中型HA和輕型HA家系，依次采用Bcl-I PCR/RFLP分析技術(shù)、基因內(nèi)含子13(CA)n及內(nèi)含子22(GT)n(AG)n二核苷酸重復(fù)序列多態(tài)性分析技術(shù)及與FVIII基因緊密連鎖的可變串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性分析技術(shù)(St14/VNTR)進(jìn)行間接基因診斷；(7)阻斷HA致病基因傳遞：步驟(6)依次進(jìn)行的各步基因診斷中，當(dāng)樣品判為HA患者或攜帶者時(shí)，終止妊娠，切斷HA致病基因的傳遞；未作的診斷步驟停止。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種應(yīng)用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法，其方法包括(1)樣品制備，(2)離心，(3)篩選分型，(4)直接基因診斷，(5)阻斷HA致病基因傳遞，(6)間接基因診斷，(7)阻斷HA致病基因傳遞等步驟。本發(fā)明的方法具有采集標(biāo)本方便，樣品用量少，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，產(chǎn)前診斷率高的特點(diǎn)，能夠有效地防止血友病A的誤診和漏診，降低血友病A的發(fā)病率。 |
| 國際公布 |
