一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應用
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公開(公告)號
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CN1511958A
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公開(公告)日
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2004.07.14
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申請(專利)號
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CN02159974.2
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申請日期
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2002.12.31
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專利名稱
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一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應用
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主分類號
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C12Q1/68
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分類號
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C12Q1/68;G01N33/68;C07K14/435;C07K14/47;A61K38/17;A61P37/06
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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王小寧
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發(fā)明(設計)人
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徐小寧;王小寧
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地址
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510630廣東省廣州市天河北路599號1801
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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代理人
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國省代碼
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廣東;44
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主權項
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一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細胞表面抗原肽的方法，其包括以下步驟：(1)用iRNA技術制備表達不同HLA抗原(包括I類和II類抗原)的、內源性抗原肽提呈表達缺陷的T2樣細胞系；(2)制備人主要及次要組織相容性抗原的肽鏈基因庫；(3)利用步驟(2)制備的基因庫，制備噬菌體肽展示體系；(4)把步驟(1)制備的T2樣細胞系與步驟(3)制備的噬菌體混合；(5)洗滌去除不結合的噬菌體；(6)利用抗噬菌體衣殼蛋白抗體檢測噬菌體結合的情況和條件；(7)用洗脫液進行梯度洗脫去除親和性不高的噬菌體；(8)加入噬菌體敏感宿主大腸桿菌使T2樣細胞上的噬菌體感染大腸桿菌，并得以擴增；(9)由大腸桿菌中進一步分離噬菌體質粒，并對其中的cDNA克隆測序、篩選出與MHC分子結合的肽段序列；(10)合成所篩選的肽段，結合至T2樣細胞用該細胞刺激T細胞反應，確認肽段T細胞表位活性。
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摘要
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本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領域，是關于一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細胞表面抗原肽的體系，及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應用。利用該組抗原肽制備的MHC-肽四聚體(MHC tetramer)可用于同種移植排斥反應的監(jiān)測，并指導臨床合理使用免疫抑制劑。
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國際公布
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