| 公開(公告)號 | CN1508265A |
| 公開(公告)日 | 2004.06.30 |
| 申請(專利)號 | CN02155058.1 |
| 申請日期 | 2002.12.20 |
| 專利名稱 | 白細(xì)胞介素－2及其基因在戒毒應(yīng)用中的測試方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68;G01N33/68;A61K48/00;A61K38/20;A61P25/36 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉新恒;顧錦法;王晉慧;姚明忠 |
| 地址 | 200031上海市岳陽路319號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王巍 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 白細(xì)胞介素-2IL-2及其基因在戒毒應(yīng)用中的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟：(1)真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-IL-2的構(gòu)建人IL-2基因經(jīng)EcoRI和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接頭的全長含信號肽的人IL-2 cDNA 462bp克隆入經(jīng)相同酶切的pcDNA3載體Invitrogen，IL-2基因在CMV啟動子的控制下表達(dá)，構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌JM109擴(kuò)增，堿裂解法制備質(zhì)粒，聚乙二醇沉淀法純化，通過測定260nm的光吸收來確定質(zhì)粒濃度，注射時質(zhì)粒稀釋于含5％葡萄糖的磷酸緩沖液中；(2)重組腺病毒Ad5-IL-2的構(gòu)建人IL-2基因經(jīng)EcoRI和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接頭的全長含信號肽的人IL-2 cDNA 462bp克隆入經(jīng)相同酶切的pCA13載體Microbix，得到pCA13-IL-2，此時IL-2基因在CMV啟動子的控制下表達(dá)，pCA13-IL-2與腺病毒基因組質(zhì)粒pBHG10 Microbix共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，進(jìn)行同源重組，篩選重組腺病毒，擴(kuò)增純化腺病毒，注射時病毒稀釋于含5％蔗糖的PBS中；(3)嗎啡依賴小鼠模型的建立以劑量遞增法形成嗎啡依賴小鼠模型，此組小鼠為嗎啡依賴組，嗎啡依賴小鼠腹腔注射納洛酮4mg.kg-1可激發(fā)戒斷癥狀，此組小鼠為嗎啡戒斷組；(4)嗎啡依賴大鼠模型的建立以劑量遞增法形成嗎啡依賴大鼠模型，此組大鼠為嗎啡依賴組，嗎啡依賴大鼠腹腔注射納洛酮4mg.kg-1可激發(fā)戒斷癥狀，此組大鼠為嗎啡戒斷組；(5)IL-2蛋白及pcDNA3質(zhì)粒介導(dǎo)IL-2基因抑制小鼠嗎啡戒斷癥狀測試方法的建立用劑量遞增法建立的嗎啡成癮小鼠模型，在末次給嗎啡3小時后，將成癮的小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，蛋白治療組：經(jīng)第52 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種白細(xì)胞介素-2(IL-2)及其基因在戒毒應(yīng)用中的測試方法。通過本發(fā)明的方法表明蛛網(wǎng)膜下腔注射IL-2蛋白有較好的戒毒作用，其效果呈劑量依賴性。pcDNA3-IL-2基因也有一定的戒毒作用，通過對該基因?qū)霔l件的進(jìn)一步優(yōu)化，其戒毒效果可望更好，更適合實際實用。 |
| 國際公布 |
