| 公開(公告)號(hào) | CN1502694A |
| 公開(公告)日 | 2004.06.09 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02145433.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.11.20 |
| 專利名稱 | 通過Cre-LoxP定點(diǎn)打靶體細(xì)胞克隆家畜作為乳腺生物反應(yīng)器的研制 |
| 主分類號(hào) | C12N15/09 |
| 分類號(hào) | C12N15/09;C12N15/12;C12N15/87;C12N5/10;A01K67/00;A01K67/027 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 上海杰隆生物工程股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 成國(guó)祥;陳建泉;吳國(guó)祥;湯家銘;趙建陽(yáng) |
| 地址 | 201203上海市浦東新區(qū)張江蔡倫路88號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 徐迅 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種定點(diǎn)打靶體細(xì)胞克隆家畜乳腺生物應(yīng)器的制備方法，其特征在于，包括步驟：(a)通過基因打靶將一構(gòu)建物定點(diǎn)引入家畜胎兒成纖維細(xì)胞，所述的構(gòu)建物從5′→3′依次含有5′同源臂序列、LoxP序列、第一標(biāo)記基因、和3′同源臂序列；(b)篩選得到LoxP序列定點(diǎn)整合的家畜胎兒成纖維細(xì)胞；(c)將打靶載體與Cre表達(dá)質(zhì)粒/Cre蛋白，共轉(zhuǎn)染LoxP序列定點(diǎn)整合的家畜胎兒成纖維細(xì)胞，所述的打靶載體從5′→3′依次含有LoxP序列、外源基因、第二標(biāo)記基因、LoxP序列，并篩選得到定點(diǎn)整合有外源基因的成纖維細(xì)胞；(d)將步驟(c)的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核，移植入家畜去核卵母細(xì)胞，再生成克隆動(dòng)物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種通過Cre-LoxP定點(diǎn)打靶體細(xì)胞克隆家畜來(lái)制備作為乳腺生物反應(yīng)器的方法。它包括：(a)將含LoxP序列的構(gòu)建物定點(diǎn)引入成纖維細(xì)胞；(b)篩選LoxP序列定點(diǎn)整合的細(xì)胞；(c)將含外源基因的打靶載體與Cre表達(dá)質(zhì)粒/Cre蛋白，共轉(zhuǎn)染LoxP序列定點(diǎn)整合的細(xì)胞，從而篩選得到定點(diǎn)整合外源基因的細(xì)胞；(d)再生成克隆動(dòng)物。本發(fā)明還提供了相應(yīng)的構(gòu)建物和克隆細(xì)胞。本發(fā)明方法可高效地制備定點(diǎn)整合外源基因的乳腺生物反應(yīng)器。 |
| 國(guó)際公布 |
