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牛乳腺炎疫苗的制備方法

公開(公告)號 CN1432408A  
公開(公告)日 2003.07.30  
申請(專利)號 CN02102302.6  
申請日期 2002.01.15  
專利名稱 牛乳腺炎疫苗的制備方法  
主分類號 A61K39/02  
分類號 A61K39/02;A61K39/108;A61P31/04  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 恒信環(huán)球農(nóng)業(yè)科技有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 詹古拉  
地址 美國加利福尼亞洲  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機構(gòu) 北京集佳專利商標(biāo)事務(wù)所  
代理人 王學(xué)強  
國省代碼 美國;US  
主權(quán)項 一種制備牛乳腺炎疫苗的方法,包括如下步驟:a.提取含有蔗糖-6果糖轉(zhuǎn)移酶(sacB)基因的質(zhì)粒;b.制備革蘭氏陰性菌感受態(tài)細(xì)胞;c.轉(zhuǎn)化步驟a中提取含有的蔗糖-6果糖轉(zhuǎn)移酶(sacB)基因的質(zhì)粒進(jìn)入步驟b所制備的革蘭氏陰性菌感受態(tài)細(xì)胞中;d.鑒定,獲得轉(zhuǎn)化的革蘭氏陰性菌;e.已轉(zhuǎn)化的革蘭氏陰性菌在細(xì)菌培養(yǎng)基中生長直到濃度達(dá)到105-1012CFU/ml;f.收集步驟e中的已轉(zhuǎn)化的革蘭氏陰性菌,室溫,400g,離心20分鐘;g.棄上清液,用1-10%(體積比)的蔗糖和清洗物質(zhì)清洗疫苗,重懸浮,在37℃下,混合20分鐘,誘導(dǎo)自殺性蔗糖-6果糖轉(zhuǎn)移酶(sacB)基因表達(dá),混合物在400g,4℃下再次離心,棄上清液;h.重復(fù)步驟g兩次;i.疫苗在清洗物質(zhì)中被懸浮,按佐劑和疫苗體積比為3∶2的比例加入佐劑,使疫苗每一次免疫量的濃度為8.0×105CFU或以上。  
摘要 本發(fā)明公開了一種牛乳腺炎疫苗的制備方法。本發(fā)明提供了利用含有核心通用抗原的革蘭氏陰性菌,通過含有蔗糖-6果糖轉(zhuǎn)移酶(sacB)基因質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,在蔗糖的誘導(dǎo)下,使革蘭氏陰性菌自殺,收集這些含有核心通用抗原的革蘭氏陰性菌,制備牛乳腺炎的疫苗的方法。本發(fā)明牛乳腺炎疫苗的制備方法不會對疫苗的免疫原性造成損害,不會產(chǎn)生替代的或非天然的疫苗抗原,所用的化學(xué)誘導(dǎo)物質(zhì)是食用的無毒的蔗糖。同時可以大大減少疫苗中的內(nèi)毒素,減少副作用,刺激免疫系統(tǒng)抵御全部的大腸桿菌,沙門氏菌等革蘭氏陰性菌所引起的牛乳腺炎。  
國際公布  
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