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釀酒酵母重組乙型肝炎病毒表面抗原流加補料發(fā)酵工藝

公開(公告)號 CN1552857A  
公開(公告)日 2004.12.08  
申請(專利)號 CN200410005407.X  
申請日期 2004.02.18  
專利名稱 釀酒酵母重組乙型肝炎病毒表面抗原流加補料發(fā)酵工藝  
主分類號 C12N15/13  
分類號 C12N15/13;C12N1/19;C12N15/63;C12N15/81;C07K16/28;C12P21/02  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 北京天壇生物制品股份有限公司;天津博薈生物技術(shù)有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 馬民強;汪和睦;周根喜;張德友  
地址 100024中國北京市朝陽區(qū)三間房南里4號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機構(gòu) 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司  
代理人 丁業(yè)平;王維玉  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項 一種利用啤酒酵母工程菌生產(chǎn)乙肝表面抗原的方法,其中所述的啤酒酵母工程菌株的受體菌是腺嘌呤、亮氨酸營養(yǎng)缺陷型的;所述的啤酒酵母工程菌包含重組2μ質(zhì)粒但不含天然的2μ質(zhì)粒;所述重組2μ質(zhì)粒包含編碼乙肝表面抗原的基因,該基因的5’端和3’端分別與3-磷酸甘油醛脫氫酶啟動子和乙醇脫氫酶終止子可操作連接;所述重組2μ質(zhì)粒還包含編碼亮氨酸的基因,該基因的5’端和3’端分別與啟動子和終止子可操作連接;該方法包括如下步驟:1)所述啤酒酵母工程菌的種子發(fā)酵步驟;2)利用步驟1)制得的種子進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)的步驟;和3)從步驟2)所得的發(fā)酵混合物中分離純化出乙肝表面抗原的步驟;該方法的特征在于,在上述在步驟2)中以腺嘌呤的重量計,以低于14mg/升·小時的速率向培養(yǎng)基中流加腺嘌呤、腺苷、腺苷一磷酸、腺苷二磷酸或腺苷三磷酸。  
摘要 本發(fā)明提供了一種利用啤酒酵母工程菌生產(chǎn)乙肝表面抗原的新方法,該方法包括如下步驟:1)所述啤酒酵母工程菌的種子發(fā)酵步驟;2)利用步驟1)制得的種子進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)的步驟;和3)從步驟2)所得的發(fā)酵混合物中分離純化出乙肝表面抗原的步驟;該方法的特征在于,在上述在步驟2)中以腺嘌呤的重量計,以低于14mg/升·小時的速率向培養(yǎng)基中流加腺嘌呤、腺苷、腺苷一磷酸、腺苷二磷酸或腺苷三磷酸。本發(fā)明的方法可顯著提高提高重組HBsAg表達(dá)水平。  
國際公布  
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