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高效表達(dá)水蛭素及其生產(chǎn)方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1328380C  
公開(kāi)(公告)日 2007.07.25  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN01141415.4  
申請(qǐng)日期 2001.09.24  
專(zhuān)利名稱(chēng) 高效表達(dá)水蛭素及其生產(chǎn)方法  
主分類(lèi)號(hào) C12N15/15(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C12N15/15(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/64(2006.01)I;C07K14/815(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 天津天士力制藥股份有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 趙 凱;吳祖澤;苑 賓;張津輝;李滿文;熊志紅;蔣中華;董春娜;曹菊榮;于愛(ài)平  
地址 300402天津市北辰科技園遼河?xùn)|路1號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國(guó)省代碼 天津;12  
主權(quán)項(xiàng) 一種新型編碼水蛭素的DNA分子,其特征在于該DNA分子與來(lái)源于水蛭的天然的水蛭素2型DNA分子相比,該DNA分子的第121位核苷酸由胞苷酸變異為鳥(niǎo)苷酸、第156位核苷酸由胸苷酸變異為胞苷酸,第157位核苷酸由腺苷酸變異為鳥(niǎo)苷酸;其前導(dǎo)序列為CTCGAGAAAAGA。  
摘要 本發(fā)明涉及一種生物工程的抗栓藥物及其生產(chǎn)方法,具體而言是涉及一種新型水蛭素及其生產(chǎn)方法。采用全人工合成的方法獲得變異的HV2全基因,在其5’端上游加入一段合適前導(dǎo)序列。構(gòu)建畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pHV2,載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞GS115,并整合入宿主細(xì)胞的染色體中。篩選高效表達(dá)菌株,經(jīng)優(yōu)化發(fā)酵誘導(dǎo)、分離純化步驟,提高了重組基因產(chǎn)物的生產(chǎn)效率,產(chǎn)物表達(dá)水平和生物學(xué)活性,以及對(duì)抗凝、抗栓的藥效學(xué)研究表明,高于文獻(xiàn)報(bào)道,這為水蛭素II型的大規(guī)模生產(chǎn)和臨床應(yīng)用的深入研究提供了物質(zhì)來(lái)源。  
國(guó)際公布  
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