雛番鴨小鵝瘟如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷?
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(1)免疫焚光抗體檢査無(wú)菌采集病鴨的肝、脾、腎、腦， 將病料按常規(guī)用冰凍切片機(jī)切成5微米厚的組織片，貼于載 玻片上，干燥后用丙酮固定12分鐘，將載玻片放入37°C水浴 箱中的染色架上，在組織切片上滴加熒光抗體，染色30分鐘 取出。先用0. 01摩爾/升磷酸鹽緩沖液(PBS,pH值8. 0)水 洗20分鐘，再用蒸餾水水洗3次，每次10分鐘，干燥后用熒光顯微鏡鏡檢。在放大200倍的視野中，可見切片上黑色的 胞核中或其邊緣有一個(gè)或數(shù)個(gè)針尖大小的清晰明亮黃綠色特 異熒光，而核以外的組織則為黃紅色或紅色。(2) 病毒分離鑒定① 病料的處理無(wú)菌采集病死鴨的肝臟、脾臟，剪碎研 磨，用滅菌生理鹽水制成懸液，比例為1 : 5,經(jīng)3 000轉(zhuǎn)/分離 心30分鐘，吸取上清液，每毫升加人
青霉素、
鏈霉素各1 000 國(guó)際單位處理，置于冰箱內(nèi)凍結(jié)保存，作病毒分離的接種材 料。② 病毒分離取以上處理好的病料，接種于12?15日齡 的鵝胚絨毛尿襄腔內(nèi)，每鵝胚接種0.5毫升，置于37°C的溫 箱孵育。每天照蛋，及時(shí)收集48?72小時(shí)死亡的鵝胚，置于 4°C?8°C的冰箱中冷凍4小時(shí)后，無(wú)菌收集上清的尿囊液，過 濾細(xì)菌，保存。剖檢死鵝胚，可見絨毛尿囊腔
水腫，全身皮膚 充血、出血和水腫，即可確診。③ 動(dòng)物回歸試驗(yàn)試驗(yàn)組：取上述病料的上清液和按 1 : 10稀釋的鵝胚絨毛尿襄液，分別接種7?10日齡的雛鵝 各5只（或5?10日齡的雛番鴨)，0? 2毫升/只�？瞻讓�(duì)照組:取無(wú)菌生理鹽水肌注7?10日齡的雛鵝5 只（或5?10日齡的雛番鴨)，0.2毫升/只。試驗(yàn)組與對(duì)照組 隔離詞養(yǎng)。如果試驗(yàn)組雛鵝(雛番鴨)發(fā)病死亡，且其臨床癥狀和剖 檢病理變化與鴨小鵝瘟自然發(fā)病的病鴨相似，而對(duì)照組的雛 鵝(雛番鴨)不出現(xiàn)任何癥狀，即可確診為小鵝瘟。(3) 血清學(xué)診斷①動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)試驗(yàn)組:取抗小鵝瘟高免血清肌注5日齡左右的雛鵝5只(或5日齡左右的雛番鴨)，1. 5?2毫升/只。6小時(shí)后注射 上法收集的按1 : 10稀釋的鵝胚絨毛尿囊液，〇. 1毫升/只。對(duì)照組:取無(wú)菌生理鹽水肌注5日齡左右的雛鵝5只(或 5日齡左右的雛番鴨)，6小時(shí)后用病毒分離收集的鵝胚絨毛 尿囊液，按1 : 10比例稀釋后注射，〇. 1毫升/只。如果試驗(yàn)組雛鵝(雛番鴨)80%以上得到保護(hù)，而對(duì)照組 80%以上發(fā)病死亡，且其臨床癥狀和剖檢病理變化與鴨小鵝 瘟自然發(fā)病的病鴨相似，即可確診為小鵝瘟。鴨小鵝瘟血清學(xué)診斷方法還有中和試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、 ELISA 等。
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