雛鴨
病毒性肝炎-----
鴨病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)簡(jiǎn)稱鴨肝炎,是主要發(fā)生于3周齡以下雛鴨的一種傳播迅速、高度致死性的傳染病。1950年,Levine P P和Fabricant J在美國(guó)首先報(bào)道了Ⅰ型鴨病毒性肝炎的發(fā)生。1954年,Asplin報(bào)道鴨病毒性肝炎在英國(guó)暴發(fā)流行。隨后,加拿大、西德、意大利、印度、法國(guó)、匈牙利、日本等國(guó)均有報(bào)道。1963年首次報(bào)道在我國(guó)的上海地區(qū)某些鴨場(chǎng)也發(fā)生鴨病毒性肝炎DHV-Ⅰ型。而DHV-Ⅱ型和DHV-Ⅲ型病毒分別于1965年發(fā)現(xiàn)于英國(guó)諾�？撕�1969年發(fā)現(xiàn)于美國(guó)長(zhǎng)島,DHV-Ⅱ型至今尚無其他國(guó)家的報(bào)道。 但近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼報(bào)道了DHV-Ⅰ型的變異情況,Barnhardt株是在美國(guó)一個(gè)農(nóng)場(chǎng)分離到的一個(gè)明顯的血清學(xué)變異株,與DHV-Ⅰ型在中和試驗(yàn)中呈部分交叉反應(yīng)。在福州地區(qū)發(fā)現(xiàn)不能被標(biāo)準(zhǔn)DHV-Ⅰ型疫苗保護(hù)的鴨肝炎。蘇敬良等從疑似鴨肝炎的病死鴨體內(nèi)分離到1株與Ⅰ型、Ⅲ型鴨肝炎病毒無血清學(xué)交叉免疫反應(yīng)的小RNA病毒,暫時(shí)將其病毒稱為新型鴨肝炎病毒。 在該病的診斷上,依據(jù)其發(fā)病日齡、臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷，但確診和病毒定型必須依賴進(jìn)一步的病原學(xué)和血清學(xué)診斷。目前，應(yīng)用于DHV的血清學(xué)診斷主要有中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和免疫熒光等,下面就近年來的診斷方法做簡(jiǎn)要概述。 1 臨床診斷 該病主要發(fā)生于3周齡以下的雛鴨,潛伏期短,常突然發(fā)病,感染雛鴨首先表現(xiàn)為跟不上群,此后短時(shí)間內(nèi)就停止運(yùn)動(dòng),蹲伏并半閉眼。病鴨身體側(cè)臥、兩腿痙攣后踢,頭向后背,呈角弓反張樣。雛鴨在出現(xiàn)癥狀后1 h左右就發(fā)生死亡。 剖檢特征性病變主要在肝臟,常表現(xiàn)為肝臟腫大、質(zhì)脆,外觀淡紅、
土黃或斑駁狀,表面有彌漫性出血點(diǎn)或出血斑；膽囊腫脹呈長(zhǎng)卵圓形充滿膽汁,膽汁常呈褐色或淡茶色；脾臟和腎臟也多有不同程度的腫脹,表面有出血點(diǎn)或呈斑駁狀；心肌常呈淡灰色,質(zhì)軟有淤血,似開水煮樣；此外,部分病例還可見喉、氣管、支氣管等有輕度卡他性炎癥及腦充血、出血等現(xiàn)象[5]。根據(jù)該病的發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化可作出初步診斷。 2 實(shí)驗(yàn)室診斷 2.1 病毒的分離和初步鑒定 病毒初代分離一般使用鴨胚,在鴨胚中連續(xù)傳幾代后,很容易在鴨胚中增殖,Levine和Fabricant（1950)首次用鴨胚分離DHV獲得成功。因目前國(guó)內(nèi)尚無SPF鴨場(chǎng),而鴨胚中又往往含有DHV母源抗體,妨礙病毒增殖,故試驗(yàn)研究以及制作疫苗時(shí)接種和傳代常用SPF雞胚,病毒感染后主要表現(xiàn)為胚胎蜷縮,發(fā)育不良,全身
水腫,體表充血且頭頸、背部等常有散在的針尖大小的出血點(diǎn)。肝臟為土黃、灰綠或鮮紅色,腫大、質(zhì)脆,出血點(diǎn)明顯,邊緣壞死或在表面有灰綠色或黃白色壞死區(qū),呈花斑狀,此外,有的雞胚尿囊液和卵黃囊還常呈綠色。胚體變化有一定的診斷意義。 獲得高純度的病毒抗原可以對(duì)病毒進(jìn)行電鏡直接觀察,并開展免疫學(xué)監(jiān)測(cè)、診斷以及分子生物學(xué)研究。Taylor(1967)試圖以硫酸銨沉淀、超速離心方法對(duì)細(xì)胞增殖的DHV進(jìn)行純化,但未能最終達(dá)到目的。以后很多學(xué)者嘗試著先離心初提,然后經(jīng)氯仿抽提,PEG反透析濃縮蔗糖密度梯度離心等方法進(jìn)行提純,以得到較為純凈的病毒,也未能如愿。楊奎以抗DHV IgG偶聯(lián)活化的Sepharose4B制成親和層析柱,提純感染致死的雛鴨肝臟勻漿中的病毒,電鏡下背景干凈,雜蛋白少,病毒大小約為40 nm,但病毒的特性未進(jìn)一步驗(yàn)證。孫剛等在電鏡下可見到直徑為32 nm～49 nm的病毒粒子,顆粒結(jié)構(gòu)清晰,大小和結(jié)構(gòu)均符合Ⅰ型ＤＨＶ的特征。 DHV由于病毒顆粒較小,得到較為純化的病毒一直困擾著研究者,很多學(xué)者通過各種提純的方法進(jìn)行嘗試,但至今尚未見到一張確切的純化病毒的電鏡
照片。 2.2 中和試驗(yàn) 由于至今尚未明確DHV的基因序列,因此該病的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依靠血清學(xué)中和試驗(yàn)加以診斷。Levine P R等（1950)首先將中和試驗(yàn)(Virus-neutralization test, VN)應(yīng)用于DHV診斷鑒定,以后逐漸為各國(guó)學(xué)者所引用。通常在雞胚上以固定血清-稀釋病毒法進(jìn)行,也有人在鴨胚、雛鴨或病毒適應(yīng)細(xì)胞中進(jìn)行試驗(yàn)。Hwang記述了一種準(zhǔn)確、可重復(fù)的Ⅰ型鴨肝炎病毒雞胚中和試驗(yàn)。Woolcock P R等[9]首先報(bào)道了用中和抗體進(jìn)行的空斑減少試驗(yàn),認(rèn)為要比雞胚中和試驗(yàn)敏感得多。Chalmers和Woolcock檢測(cè)了從16個(gè)非感染鴨收集的血清,其半數(shù)空斑減少滴度(VN)在1∶12到1∶250之間,平均1∶59。他們建議陰性對(duì)照血清的最大空斑減少滴度應(yīng)設(shè)為1∶250。Kaleta E F[10]用北京鴨腎細(xì)胞培養(yǎng)的DHV進(jìn)行了微量中和試驗(yàn),既快速又易于判定終點(diǎn)。陳琨等成功地在鴨胚單層肝細(xì)胞上進(jìn)行了DHV-Ⅰ型的微量血清中和試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)DHV形成CPE的能力可以被特異性血清中和,可以用于病毒鑒定、疫病診斷和免疫檢測(cè)。 到目前為止,VN仍是診斷鴨病毒性肝炎的最可靠的方法,該方法被認(rèn)為是既特異又敏感,是公認(rèn)的方法。缺點(diǎn)為煩瑣、費(fèi)時(shí)，不能快速診斷,不適于基層應(yīng)用。
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