如何通過血清學(xué)診斷豬
痢疾?
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血清學(xué)診斷 1．熒光抗體染色法 將病豬糞便或培養(yǎng)物直接涂片2張，一張用草酸按結(jié)晶紫染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)蛇形螺旋體時再將另一張片子做熒光抗體染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)黃綠色螺旋樣菌體，即為豬痢疾蛇樣螺旋體。 熒光抗體試驗( FAT)：病料涂片干燥后，火焰固定，滴加豬痢疾熒光抗體，37℃染色30min，再用PBS液沖洗3次，每次3min，最后用蒸餾水沖洗，晾干，用
甘油緩沖鹽水封片，熒光顯微鏡檢查，如見有黃綠色螺旋體樣菌體，即可確診。本法可能出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果。 2．凝集試驗 (1)顯微凝集試驗：將被檢血清滅活做8- 256倍系列稀釋，再分別加入等量抗原(含滅活菌500萬個／mL)，在22 - 37℃中感作2h。用接種環(huán)取各梯度混合液，分別滴在玻片上，在顯微鏡下觀察。效價（抗體效價為50%凝集的血清最高稀釋度)32為陽性。 (2)微量凝集試驗(MAr)：以含1%胎牛（
兔)血清的PBS(pH7.2)0.05mL，分別滴人微量滴定板（V形孔)1-6孔。將1 0倍系列稀釋的滅活被檢血清0.05mL加入第1孔，并行倍比稀釋至第5孔(160倍)，第6孔為抗原對照。每孔各加抗原(含滅活菌12億個／mL) 0.05mL，輕微振蕩后置38℃16-18h，再室溫靜置l-2h。血清效價以50%凝集最高效價表示，感染豬群參考凝集效價（> 10%抽樣檢測，幾何平均效價)XG-1：40。 本法對感染豬群的檢出率與分離培養(yǎng)相同，具有一定的診斷價值。 Burrows等(1981)證實玻片凝集試驗(SAT)在英國是有效和特異的鑒別蛇形螺旋體的方法，但要求在瓊脂表面生長的螺旋體達到一定的數(shù)量。通常獲得足量的純培養(yǎng)物很難，需2-3周，且本方法不能區(qū)別無毒的蛇形螺旋體的vSl株，SAT的鹽水對照中有時出現(xiàn)一些特異性凝集。R.J.Lysons(1991)瞄述了顯微鏡下檢查凝集( MAT)的方法，螺旋體與多克隆血清混懸在400倍相差或暗視野顯微鏡下能容易地看到凝集（以鹽水代替血清為對照)。以0%-50%凝集判為陽性。50%-100%凝集為強陽生。凝集不足10%為陰性。MAT只需少量螺旋體。立用SAT血清進行MAT，能準(zhǔn)確無誤地鑒別所有分離物。然而，某些蛇形螺旋體菌株的反應(yīng)比SAT的反應(yīng)弱。 3．瓊脂免疫擴散試驗Tric緩沖液(pH8.5)OOmL加入瓊脂糖0.9g，充分煮沸融化后，向直徑內(nèi)85mm平皿注入20mL，自然凝固后用外徑3mm打孔器，按六角形圖案打孔，中心孔與周圍孔距為2mm。中心孔滴入抗原，周圍孔分別滴人待檢血清、陽性和陰性對照血清。置37℃濕盒，24h觀察結(jié)果，抗原與持檢血清孔之間出現(xiàn)特異性沉淀線者判為陽性。 4．酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA) 以熱酚一水(68 ℃)提取I7xII型菌體脂多糖（各溶于0.05mL幾碳酸鹽緩沖液中，含量分別l0ug/mL及l(fā)Oug/mL)，包被于固相載體(4 C|C，24h)，以含1%吐溫-80和0.5%
牛血清
白蛋白的PBS洗滌。加2倍系列梯度稀釋的被檢血清，置37 ℃保溫2h，洗滌。再加
辣根過氧化酶標(biāo)記的兔抗豬免疫球蛋白溶液(1：400)，37℃ l.5h，洗滌，最后加底物溶液并終止反應(yīng)，在室溫中輕搖4min，然后在波長405nm下記錄光吸收值。豬感染后的1-2周，可用本法測出ELISA滴度，感染后3周達到高峰，19周以后仍保持高于本底光吸收值2-3倍水平。表明ELISA比MAT敏感，可用于個體感染豬的診斷。
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