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免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第一節(jié) 液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)

一、絮狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)為歷史較久,又較有用的方法。該法要點(diǎn)是:將抗原與抗體溶液混合在一起,在電解質(zhì)存在下,抗原與抗體結(jié)合,形成絮狀沉淀物。這種沉淀試驗(yàn)受到抗原和抗體比例的直接影響,因而產(chǎn)生了兩種最適比例的基本測定方法。(一)抗原稀payment-defi.com…

一、絮狀沉淀試驗(yàn)

絮狀沉淀試驗(yàn)為歷史較久,又較有用的方法。該法要點(diǎn)是:將抗原與抗體溶液混合在一起,在電解質(zhì)存在下,抗原與抗體結(jié)合,形成絮狀沉淀物。這種沉淀試驗(yàn)受到抗原和抗體比例的直接影響,因而產(chǎn)生了兩種最適比例的基本測定方法。

(一)抗原稀payment-defi.com/jianyan/釋法

抗原稀釋法(Dean-Webb法)是將可溶性抗原作一系列稀釋,與恒定濃度的抗血清等量混合,置室溫或37℃反應(yīng)后,產(chǎn)生的沉淀物隨抗原的變化而不同。表12-1系以牛血白蛋白為例的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

表12-1Dean-Webb定量沉淀試驗(yàn)

管號(hào)抗原抗體總沉淀量反應(yīng)過剩物抗原沉淀量抗體沉淀量沉淀中Ab/Ag
10.0030.680.093Ab0.0030.09030.0
20.0050.680.145Ab0.0050.14028.0
30.0110.680.249Ab0.0110.23821.7
40.0210.680.422Ab0.0210.40119.1
50.0320.680.571Ab0.0320.53916.8
60.0430.680.7340.0430.69116.1
70.0640.680.720Ab
80.0850.680.601Ag
90.1710.680.464Ag
100.3410.680.368Ag

單位:mmol/L

從表12-1可以看出,1~5管為抗體過剩管,7~10管為抗原過剩管,唯第6管沉淀物最多,兩者之比為16:1,即最適比。

(二)抗體稀釋法(Ramon)法

本法采用恒定的抗原量與不同程度稀釋的抗體反應(yīng),計(jì)算結(jié)果同上法,得出的是抗體結(jié)合價(jià)和最適比。

現(xiàn)今,為了取得抗原與抗體的最佳比例,已將以上兩法相結(jié)合,即抗原和抗體同時(shí)稀釋,稱為棋盤格法(亦稱方陣法),找出最佳配比。舉例見表12-2。

表12-2方陣最適比測定

抗體稀釋度抗原稀釋度
1/101/201/401/801/1601/3201/6401/12對(duì)照 
1/5++++++++++±
1/10+++++++++++
1/20+++++++++
1/40±+++++++
1/80

“+”為沉淀物量:為最適比

從表12-2可以看出,方陣法可較正確地找出抗原與抗體的最適比。如抗體用1:40。抗原則按1:320稀釋;如抗原是1:160,抗本則用1:20最為恰當(dāng)。

二、環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

環(huán)狀沉淀試驗(yàn)是Ascoli于1902年建立的,其方法payment-defi.com/wszg/是:先將抗血清加入內(nèi)徑1.5~2mm小玻管中,約裝1/3高度,再用細(xì)長滴管沿管壁疊加抗原溶液。因抗血清蛋白濃度高,比重較抗原大,所以兩液交界處可形成清晰的界面。此處抗原抗體反應(yīng)生成的沉淀在一定時(shí)間內(nèi)不下沉。一般在室溫放置10min至數(shù)小時(shí),在兩液交界處呈現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀則為陽性反應(yīng)。本技術(shù)的敏感度為3~20μg/ml抗原量。環(huán)狀試驗(yàn)中抗原、抗體溶液須澄清。該試驗(yàn)主要用于鑒定微量抗原,如法醫(yī)學(xué)中鑒定血跡,流行病學(xué)用于檢查媒介昆蟲體內(nèi)的微量抗原等,亦可用于鑒定細(xì)菌多糖抗原。因該技術(shù)敏感度低,且不能作兩種以上抗原的分析鑒別,現(xiàn)已少用。

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