絮狀沉淀試驗(yàn)為歷史較久,又較有用的方法。該法要點(diǎn)是:將抗原與抗體溶液混合在一起,在電解質(zhì)存在下,抗原與抗體結(jié)合,形成絮狀沉淀物。這種沉淀試驗(yàn)受到抗原和抗體比例的直接影響,因而產(chǎn)生了兩種最適比例的基本測定方法。
(一)抗原稀payment-defi.com/jianyan/釋法
抗原稀釋法(Dean-Webb法)是將可溶性抗原作一系列稀釋,與恒定濃度的抗血清等量混合,置室溫或37℃反應(yīng)后,產(chǎn)生的沉淀物隨抗原的變化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白為例的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
表12-1Dean-Webb定量沉淀試驗(yàn)
管號(hào) | 抗原 | 抗體 | 總沉淀量 | 反應(yīng)過剩物 | 抗原沉淀量 | 抗體沉淀量 | 沉淀中Ab/Ag |
1 | 0.003 | 0.68 | 0.093 | Ab | 0.003 | 0.090 | 30.0 |
2 | 0.005 | 0.68 | 0.145 | Ab | 0.005 | 0.140 | 28.0 |
3 | 0.011 | 0.68 | 0.249 | Ab | 0.011 | 0.238 | 21.7 |
4 | 0.021 | 0.68 | 0.422 | Ab | 0.021 | 0.401 | 19.1 |
5 | 0.032 | 0.68 | 0.571 | Ab | 0.032 | 0.539 | 16.8 |
6 | 0.043 | 0.68 | 0.734 | - | 0.043 | 0.691 | 16.1 |
7 | 0.064 | 0.68 | 0.720 | Ab | - | - | - |
8 | 0.085 | 0.68 | 0.601 | Ag | - | - | - |
9 | 0.171 | 0.68 | 0.464 | Ag | - | - | - |
10 | 0.341 | 0.68 | 0.368 | Ag | - | - | - |
單位:mmol/L
從表12-1可以看出,1~5管為抗體過剩管,7~10管為抗原過剩管,唯第6管沉淀物最多,兩者之比為16:1,即最適比。
(二)抗體稀釋法(Ramon)法
本法采用恒定的抗原量與不同程度稀釋的抗體反應(yīng),計(jì)算結(jié)果同上法,得出的是抗體結(jié)合價(jià)和最適比。
現(xiàn)今,為了取得抗原與抗體的最佳比例,已將以上兩法相結(jié)合,即抗原和抗體同時(shí)稀釋,稱為棋盤格法(亦稱方陣法),找出最佳配比。舉例見表12-2。
表12-2方陣最適比測定
抗體稀釋度 | 抗原稀釋度 | ||||||||
1/10 | 1/20 | 1/40 | 1/80 | 1/160 | 1/320 | 1/640 | 1/12 | 對(duì)照 | |
1/5 | + | ++ | +++ | +++ | ++ | + | ± | - | - |
1/10 | + | ++ | ++ | ++ | +++ | ++ | + | - | - |
1/20 | + | + | ++ | ++ | +++ | ++ | + | - | - |
1/40 | - | ± | + | + | ++ | +++ | ++ | + | - |
1/80 | - | - | - | - | + | + | + | + | - |
“+”為沉淀物量:為最適比
從表12-2可以看出,方陣法可較正確地找出抗原與抗體的最適比。如抗體用1:40。抗原則按1:320稀釋;如抗原是1:160,抗本則用1:20最為恰當(dāng)。
環(huán)狀沉淀試驗(yàn)是Ascoli于1902年建立的,其方法payment-defi.com/wszg/是:先將抗血清加入內(nèi)徑1.5~2mm小玻管中,約裝1/3高度,再用細(xì)長滴管沿管壁疊加抗原溶液。因抗血清蛋白濃度高,比重較抗原大,所以兩液交界處可形成清晰的界面。此處抗原抗體反應(yīng)生成的沉淀在一定時(shí)間內(nèi)不下沉。一般在室溫放置10min至數(shù)小時(shí),在兩液交界處呈現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀則為陽性反應(yīng)。本技術(shù)的敏感度為3~20μg/ml抗原量。環(huán)狀試驗(yàn)中抗原、抗體溶液須澄清。該試驗(yàn)主要用于鑒定微量抗原,如法醫(yī)學(xué)中鑒定血跡,流行病學(xué)用于檢查媒介昆蟲體內(nèi)的微量抗原等,亦可用于鑒定細(xì)菌多糖抗原。因該技術(shù)敏感度低,且不能作兩種以上抗原的分析鑒別,現(xiàn)已少用。